הכנה מבוססת אגרוז של פרוסות ריאה חתוכות בדייקנות אנושית

התחילו עם ריאה אנושית שנכרתה.

הכנס צינור סיליקון לסימפונות הראשיים של הריאה. אבטח את הצינור, וספק מסלול להחדרת אגרוז לרקמה בשלבים הבאים.

מהדק סמפונות וכלים אחרים כדי למנוע דליפת אגרוז במהלך המילוי.

הכניסו לריאה אגרוז דל ג'ל מחומם מראש מעורבב עם מדיה עד שהוא מנופח במלואו.

הנח את הריאה על קרח לפילמור אגרוז, ויוצר מטריצת ג'ל מוצקה המספקת יציבות לרקמה ושומרת על ארכיטקטורת הריאות במהלך הליכי חתך.

לאחר פילמור חותכים את רקמת הריאה ללוחות אחידים. חלץ ליבות רקמה גליליות מלוחות הרקמה.

בעזרת פורס רקמות מלא במאגר צונן, פורסים את ליבת הרקמה לקבלת פרוסות ריאה חתוכות במדויק.

מעבירים את הפרוסות לצלחת תרבות המכילה מדיה צוננת. דגירה כדי לייצב את הרקמה.

לבסוף, העבירו את הפרוסות לצלחת מרובת בארות המכילה מדיה. פרוסות הריאה המוכנות שנחתכו במדויק מוכנות כעת לניסויים.

כדי להתחיל בהליך זה, יש לקנול את קנה הנשימה על ידי החדרת צינור הסיליקון, וקיבועו עם מהדק מקביל לצינור כך שהמהדק לוחץ את הרקמה יחד לצד צינור הסיליקון מבלי לצבוט אותו. סגור את כל שאר הסמפונות, כלי הדם והפציעות בעזרת מלחציים כך שאף אגרוז לא יוכל לדלוף החוצה במהלך הליך המילוי.

יש צורך במיומנויות אנטומיות טובות כדי לקנול את הסימפונות הראשיים. אין להרחיב את הריאות יותר מדי אחרת הרקמה תסיח את דעתה, ואם הרקמה לא תתמלא מספיק, אי אפשר יהיה ליצור PCLS מכיוון שהרקמה רכה מדי.

לאחר מכן, מערבבים נפח שווה ערך של 3% אגרוז דל ג'ל עם מדיום תרבית בכוס, ומחדירים את התערובת לריאה באמצעות מזרק של 50 מיליליטר. לפני מילוי המזרק במדיום, clamp סגור את הקטטר באצבעות או clamp כדי למנוע בועות אוויר ושטף נטול אגרוז. חותכים את רקמת הריאה ללוחות של 3 עד 5 סנטימטרים.

מלאו את פורס הטישו ב-400 מיליליטר EBSS קר כקרח. מיד חותכים את ליבות הרקמה הגליליות מלוחות הריאה באמצעות מברג חצי אוטומטי עם כלי ליבה. לאחר מכן, העבר את ליבות הרקמה למחזיק הרקמות של פורס הרקמות. הניחו את המשקל על גבי ליבת הרקמה והתחילו לחתוך את ליבת הרקמה ל-PCLS. יש לנקז את המדיום מפורס הרקמות לכוס על ידי פתיחת המהדק של גליל הזכוכית.

לאחר מכן, העבירו את הפרוסות מכוס לצלחת פטרי עם מדיום תרבותי. לאחר מכן, הכניסו את צלחת הפטרי לאינקובטור ואפשרו למדיום להתחמם לפני שלבי הכביסה. לאחר מכן, העבירו את פרוסות הריאה בזהירות לצלחת תרבית של 24 בארות עם מינימום של 500 מיקרוליטר מדיום תרבית לשתי פרוסות לבאר.