בדיקה למדידת ציטוטוקסיות כימית בפרוסות ריאה חתוכות במדויק בבני אדם

קח צלחת מרובת בארות המכילה פרוסות ריאה אנושיות שנחתכו במדויק, השומרות על המיקרו-ארכיטקטורת הריאות המקומית.

הסר מדיה. הוסף ריכוזי חומרי בדיקה הולכים וגדלים לבארות ודגירה.

בהתאם לפוטנציאל הציטוטוקסי שלו, חומר הבדיקה משבש את קרומי התאים, גורם למוות תאים ומפחית תאים ברי קיימא בתוך הפרוסות.

לאחר הדגירה, הסר מדיה. טבלו את הפרוסות במצע המכיל מלח טטרזוליום מסיס במים, או WST-1, ומגיב צימוד אלקטרונים.

דגירה. בתאים פעילים מטבולית, מערכת הובלת האלקטרונים של ממברנת הפלזמה מעבירה אלקטרונים מ-NADH תוך-תאי למגיב צימוד האלקטרונים החוץ-תאי, ומפחיתה את הצבע האטום לתאים WST-1 לפורמזן יציב, צהוב כהה ומסיס במים.

לאחר הדגירה, יש לנער את הצלחת כדי לפזר באופן שווה את הפורמזן ולהעביר אותו לצלחת מרובת בארות.

בעזרת קורא מיקרופלייט, מדוד את ספיגת הפורמזן, המעיד על כדאיות הרקמה.

ירידה בספיגת הפורמזן, התלויה בריכוז חומר הבדיקה, מעידה על ירידה בכדאיות פרוסת הריאה, המאשרת את הציטוטוקסיות של חומר הבדיקה.

להכנת תערובת מאסטר של תמיסת העבודה, יש לדלל 25 מיקרוליטר של מגיב WST-1 ו -225 מיקרוליטר בינוני לכל באר. לאחר מכן, פיפטה 250 מיקרוליטר מתמיסת העבודה של תערובת המאסטר של WST-1 לכל באר, ודגירה על הצלחת ב -37 מעלות צלזיוס למשך שעה. ודא שה-PCLS מכוסה במלואו על ידי מגיב WST-1 במהלך הדגירה.

לאחר מכן, הנח את הצלחת על שייקר