אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:54 דק׳ • July 8th, 2025
קח טחול מדולדל תאי דם אדומים במאגר המכיל צבע פלואורסצנטי רגיש לסידן, Indo-1 AM.
אסטרזות תוך-תאיות מבקעות את Indo-1 AM ל-Indo-1 אטום לממברנה, שנקשר ליוני סידן, ומשנה את אות הקרינה של Indo-1 מכחול לסגול.
הציגו נוגדנים ספציפיים לאנטיגן מצומדים פלואורופור הנקשרים במיוחד לאנטיגנים המתאימים בתאים.
באמצעות ציטומטריית זרימה, זהה תאי B המסומנים בפלואורופור ומדוד את יחס הקרינה הסגול לכחול שלהם בהודו-1.
כעת, טפל בתאים עם ליפוזומים אנטיגניים המורכבים מקטעי IgM Fab המצומדים לליפוזומים דו-שכבתיים.
קולטני תאי B נקשרים לאנטיגנים המחוברים לליפוזום, מפעילים את הטירוזין קינאזות הציטופלזמיות הקשורות ומפעילים את הפעלת פוספוליפאז-C גמא-2.
פוספוליפאז-C מופעל מבקע את הממברנה פוספוליפיד, פוספטידילינוזיטול 4,5-ביספוספט, ויוצר שליחים שניים, כולל אינוזיטול 1,4,5-טריפוספט, או IP3.
IP3 נקשר לתעלות סידן מגודרות IP3 ברטיקולום האנדופלזמי, ומשחרר יוני סידן לציטופלזמה.
יוני סידן אלה קושרים את מולקולות Indo-1 הבלתי קשורות, ומגבירים את הקרינה הסגולה.
יחס פלואורסצנטי גבוה יותר של הודו-1 סגול לכחול בתאי B מסומנים מאשר את הפעלתם המוצלחת על ידי ליפוזומים אנטיגניים.
כדי לעקוב אחר תגובת תאי B להפעלת ליפוזום אנטיגני, השהה מחדש 1.5 x 107 טחול במאגר העמסת שטף סידן, והוסף 1.5 אינדו-1 מיקרו-מולרי לתאים, והפוך את התמיסה בצינור מס
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים