טכניקה לכימות זיהום פטרייתי בזחלי דגי זברה

קח זחל דג זברה שהוזרק עם נבגי פטריות בחדר המוח האחורי.

מקרופאגים מגויסים לאתר ההזרקה, ויוצרים מקבץ הדוק סביב הנבגים.

הנבגים עוברים בליעה פגוציטית על ידי מקרופאגים.

לנבגים אלה יש את היכולת להתנגד לפירוק בתוך הפגוזום, מה שמאפשר להם לנבוט לתוך קורים ולגרום למוות של תאים נמקיים של המקרופאגים.

לקורות יש דפוסים מולקולריים חשופים הקשורים לפתוגן, או PAMPs, על פני השטח שלהם.

נויטרופילים המגויסים לאתר ההדבקה, מזהים וקושרים PAMPs. מגע עם נויטרופילים מפעיל פנוטיפ היפר-מסועף מורכב בקורים, ובכך מעכב את בליעתם על ידי נויטרופילים ומקל על התחמקות חיסונית.

הומוגניזציה של הזחל, שחרור נבגי הפטרייה והקורים הקיימאים. צנטריפוגה להסרת פסולת תאית וצלחת הסופרנטנט על מצע גידול.

עם הדגירה, ספרו את היחידות היוצרות מושבות פטרייתיות או CFUs.

ספירת CFU מייצגת את מספר נבגי הפטרייה הקיימים שחמקו מההגנות החיסוניות של המארח.

מיד לאחר ההזרקה, העבירו שמונה מהזחלים לצינורות בודדים של 1.7 מיליליטר, והרדימו אותם. הכן 1 מיליליטר PBS עם אמפיצילין וקנאמיצין. הסר כמה שיותר נוזלים מהצינורות עם הזחלים. לאחר מכן, הוסף 90 מיקרוליטר של PBS עם אנטיביוטיקה.

הומוגניזציה של הזחלים בליזר רקמות ב-1,800 תנודות לדקה למשך 6 דקות. לאחר מכן, סובב אותם ב-17,000 פעמים גרם למשך 30 שניות. פיפט את התרחיף ההומוגני מכל צינור לאמצע צלחת GMM מסומנת, ופזר אותו באמצעות מפזר חד פעמי בצורת L, תוך הקפדה להימנע מהתפשטות על השפה. דגרו את הצלחות הפוכות בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך יומיים עד שלושה. לאחר מכן, ספרו את מספר המושבות שנוצרו.