אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 6:34 דק׳ • July 8th, 2025
קחו למשל תרחיף של Bacillus anthracis שנהרג כימית, עם תווית פלואורסצנטית.
קפסולת החיידקים, המורכבת בעיקר מחומצה פולי-גמא-גלוטמית, מספקת הגנה מפני פגוציטוזיס.
קח סרה פרימטים לא אנושיים, מושבתת בחום כדי להשמיד חלבונים משלימים. סרות אלה, שבודדו מבעלי חיים שחוסנו בחיסון המבוסס על קפסולת חיידקים, מכילות נוגדנים נגד קפסולות.
הוסף את תרחיף החיידקים שנהרג כימית לסרה. הנוגדנים נקשרים במיוחד לקפסולות החיידקים, מה שמקל על אופסוניזציה של חיידקים ומסמן אותם לחיסול על ידי תאים פגוציטים. הוסף חלבוני השלמה סטנדרטיים כדי לשפר את האופסוניזציה.
העבירו את החיידקים האופסונים למקרופאגים דבוקים - תאים פגוציטים. דגירה קצרה.
הנוגדנים והחלבונים המשלימים על החיידקים נקשרים לקולטני Fc מקרופאגים ולקולטני השלמה, בהתאמה, ומקדמים היצמדות חיידקים.
הסר מדיה. יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר חיידקים שאינם נדבקים.
תקן את התאים כדי לשמור על שלמות התאים.
השתמש בכתם פלואורסצנטי כדי לתייג את המקרופאגים.
באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, התבונן בחיידקים פלואורסצנטיים הנצמדים למקרופאגים פלואורסצנטיים שונים, המאשרים אופסוניזציה חיידקית יעילה על ידי נוגדנים נגד קפסולות.
שטפו את מלאי החיידקים המומת שלוש פעמים ב-PBS כדי להסיר קיבוע. הוסף תמיסת FITC בריכוז סופי של 75 מיקרוגרם למיליליטר. מערבבים לאט את התערובת במשך 18 עד 24 שעות בחום של א
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים