אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:54 דק׳ • July 8th, 2025
התחילו בציפוי כיסוי בפולי-L-ליזין שעבר ביוטיניליז ליצירת משטח עשיר בביוטין.
לאחר מכן, הכניסו סטרפטווידין - חלבון שנקשר לביוטין, ויוצר גשר מולקולרי לאינטראקציות הבאות.
לאחר מכן, הוסף פפטידים מצולמים ביוטיניליים הקשורים לקומפלקסים עיקריים של תאימות היסטולוגית - pMHCs יחד עם מולקולות הידבקות.
ליגנדי ה-pMHC הביוטיניים ומולקולות ההדבקה מקיימים אינטראקציה עם אזורים ספציפיים בסטרפטווידין, ומאפשרים את קיבועם.
לאחר מכן, שטפו את זכוכית הכיסוי במי מלח חוצצים שוב ושוב והציגו תאי T.
נוכחותו של כלוב פוטו, קבוצה כימית רגישה לאור הקשורה לשאריות ספציפיות על הפפטיד, חוסמת את הקישור הספונטני של קולטן תאי T לפפטיד.
להפעלה מבוקרת של תאי T, חשוף את הפפטידים המצולמים לאור אולטרה סגול.
אור ה-UV שובר את הקשר הכימי בין קומפלקס הפוטו-פפטיד, וחושף את הצורה המקורית של הפפטיד.
קולטני תאי T מזהים ונצמדים לפפטידים חשופים, בעוד אינטגרינים נקשרים למולקולות הדבקה, ומפעילים את הפעלת תאי T.
התחל בהוספת פולי-L-ליזין ביוטיניל או ביו-PLL מדולל 1 עד 500 במים מזוקקים נטולי יונים ל-8 זכוכית כיסוי עם 8 תאים. דגירה למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר הדגירה יש לשטוף במים מזוקקים דה-יונים ולאחר מכן לייבש במשך שעתיים בטמפרטורת החדר.
חסום משטחים מצופים ביו-PLL עם מאגר חוסם המורכב מתמיסת מלח עם חוצץ HEPES עם 2% BSA למשך 30 דקות בטמ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים