הערכת טופולוגיית סינפסה אימונולוגית באמצעות דימות תאים חיים

קח צלחת מיקרוסקופ עם מאגר המכיל תאי אנדותל אנושיים שעברו טרנספטציה וטופלו בסופר-אנטיגן, כאשר הסופר-אנטיגנים מורכבים למולקולות MHC מסוג II.

תאים מציגי אנטיגן מלאכותיים אלה מבטאים במשותף חלבונים פלואורסצנטיים שונים על הממברנות והציטופלזמה שלהם.

לאחר מכן, הציגו לימפוציטים מסוג T, המקיימים אינטראקציה עם הסופר-אנטיגנים בתאי האנדותל באמצעות קולטני תאי T, ויוצרים צומת תא-תא יציב, סינפסה אימונולוגית.

זה מפעיל סידור מחדש של שלד התא של לימפוציטים מסוג T, יוזם התפשטות תאים והרחבת אקטין, וכתוצאה מכך נוצרות בליטות דמויות פולשניות, או ILPs, המועשרות באקטין, הידבקות ומולקולות איתות.

מולקולות הידבקות קושרות קולטנים ספציפיים על תאי האנדותל, ומחזקות את האינטראקציה.

היווצרות סינפסה מפעילה מסלולי איתות של לימפוציטים מסוג T, מעלה את רמות הסידן התוך תאיות ומייצבת ILPs.

ILPs גורמים לכיפוף ממברנה מקומי בתאי אנדותל, ויוצרים טבעות משטח חולפות.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, נתח את טופולוגיית הסינפסה הכוללת אזורים מעגליים כהים של תזוזה של ציטופלזמה פלואורסצנטית בתא האנדותל, במיקום משותף עם טבעות ממברנה פלואורסצנטיות שונות סביב ILPs, המאשרות היווצרות סינפסות אימונולוגיות.

כדי לצלם את התאים בשידור חי, הפעל את מערכת המיקרוסקופ ופתח את תוכנת לכידת התמונות המתאימה. הגדר את הפרמטרים המתאימים להדמיית זמן-lapse רב-ערוצי