שיטת לוקליזציה של In Vivo Immunofluorescence לחקר הפצה ביולוגית של נוגדנים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 6:15 דק׳ • July 8th, 2025
קחו מודל עכברי של סרטן השד. גידולי בלוטת החלב מורכבים מתאי סרטן, פיברובלסטים הקשורים לסרטן, אדיפוציטים, תאי חיסון וכלי דם גידוליים.
הזרקה תוך ורידית של נוגדנים ספציפיים לגידול מצומד פלואורופור.
עם הגעתם לכלי הדם של הגידול, הנוגדנים נקשרים לחלבונים טרנסממברניים ספציפיים לגידול באנדותל כלי הדם ובתאי סרטן סמוכים.
יש לבודד בניתוח את בלוטת החלב ולהטביע אותה במדיום הקפאה.
השג חתכי קריו על שקופית ושטוף עם מאגר כדי להסיר את מדיום ההקפאה.
תקן את החלקים כדי לשמר את ארכיטקטורת הרקמות. מרחו חומר ניקוי לשיפור צביעה חיסונית ותמיסת חסימה למניעת קשירת נוגדנים לא ספציפיים.
הציגו נוגדן ראשוני ספציפי למולקולות הידבקות על האנדותל של כלי הדם, ונוגדנים משניים מצומדים פלואורופור שנקשרים לנוגדנים הראשוניים, ומסמנים את כלי הדם.
הוסף אמצעי הרכבה על המגלשה והנח כיסוי.
תחת מיקרוסקופ קונפוקלי, הערך את ההתפלגות הביולוגית של נוגדנים ספציפיים לגידול בתוך ומסביב לכלי הדם של הגידול המסומן פלואורסצנטי.
לאחר ההרדמה כמתואר בפרוטוקול הטקסט, התכוננו לחיסון וריד הזנב של תמיסות הנוגדנים. יש לחטא את זנב החיה על ידי ניגוב שלוש פעמים במגבון אלכוהול. הרחב את ורידי הזנב על ידי חימום עם כרית חום למשך כ-30 שניות; הימנע מחימום החיה כולה. בעזרת קטטר שבשבת זנב בגודל 27 הכנס את מחט הפרפר לאחד משני ורידי הזנב הצדדיים.
דמיין זרימת דם
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים