מולטיפלקס מבוסס חרוזים לזיהוי נוגדנים ספציפיים לפתוגן ברוק

קחו תערובת של קבוצות שונות של מיקרוספירות - או חרוזי פוליסטירן בגודל מיקרון.

כל קבוצה מחוברת לאנטיגן ייחודי מפתוגן סביבתי ומסומנת באופן פלואורסצנטי ייחודי.

מוסיפים את התערובת לצלחת סינון המכילה קרום בתחתית.

הכנס רוק אנושי המכיל נוגדנים נגד פתוגנים סביבתיים, הנקשרים לאנטיגנים קוגניטים במיקרוספרות.

הסר נוגדנים לא קשורים בוואקום. נוגדנים הקשורים למיקרוספירה נשמרים בשל גודל הנקבוביות הקטן של הממברנה.

הוסף נוגדנים משניים ביוטיניליים כדי להיקשר לנוגדנים הקשורים למיקרוספרה. הסר נוגדנים לא קשורים.

הוסף סטרפטווידין מצומד לצבע מדווח פלואורסצנטי, שנקשר לביוטין על הנוגדנים המשניים.

הסר את הצבע הלא קשור, השהה מחדש את המיקרוספירות והעביר אותן דרך מנתח אימונו-מולטיפלקס.

קרן לייזר מזהה את הקרינה של המיקרוספרה, ומזהה את האנטיגן, בעוד קרן אחרת מזהה את אות המדווח, ומאשרת נוגדן קשור.

נוגדנים ספציפיים לאנטיגן ברוק מצביעים על חשיפה קודמת לפתוגנים המתאימים.

לאחר השעיית מלאי החרוזים המצומדים לאנטיגן על ידי מערבולת וסוניקציה למשך 20 שניות, יש לדלל את מלאי החרוזים המצומדים לריכוז סופי של 100 חרוזים למיקרוליטר מכל ערכת חרוזים ייחודית ב-PBS בתוספת BSA. לאחר מכן, הכינו דילול של 1 עד 4 של רוק בטמפרטורת החדר ב- PBS בתוספת BSA בצלחת באר עמוקה של 96 בארות. הרטיבו מראש צלחת סינון עם 100 מיקרוליטר מאגר כביסה, ושאבו