כימות רמות המתווך החיסוני בנוזל רירית האדם

הפשירו את ניירות הסינון המכילים את נוזל רירית האף הנספג על קרח כדי למנוע פירוק הדגימה.

הנוזל מורכב ממתווכים חיסוניים, כולל כימוקינים וציטוקינים.

טבלו את ניירות הסינון במאגר. העבירו את התוכן למסנני צינורות. צנטריפוגה כדי לסלק את נוזל הרירית מנייר הסינון.

הוסף את תמצית האף המסוננת ללוחית הבדיקה בדוגמת מערך של נוגדני לכידה ספציפיים למתווך.

המתווכים החיסוניים נקשרים לנוגדנים המתאימים להם.

הכנס נוגדנים לזיהוי המסומנים בקומפלקס רותניום, הנקשרים למתווכים שלהם.

הוסף בופר מבוסס טריס המכיל טריפרופילמין, או TPA.

כאשר מופעל פוטנציאל על פני האלקטרודות, קומפלקס הרותניום וה-TPA עוברים חמצון.

רדיקל ה-TPA שנוצר מעורר את קומפלקס הרותניום.

עם חזרתו למצב הקרקע שלו, קומפלקס רותניום פולט פוטונים.

עוצמת האור הנמדדת פרופורציונלית לריכוז המתווך החיסוני הספציפי בנוזל הרירית.

לכימות מתווך חיסוני של דרכי הנשימה, הניחו עד 10 דגימות מאחסון שלילי של 80 מעלות צלזיוס על קרח, ורשמו את מספרי הזיהוי שלהן. לאחר שהדגימות הופשרו, טבלו את שני ניירות הסינון לכל נושא ב-150 מיקרוליטר של חיץ טרי שהוכן לכל נייר סינון.

השלם אותו עם טבליה אחת שלמה של מעכב פרוטאז לכל 25 מיליליטר של תמיסת מלאי חיץ. מעבירים את הדגימות לשייקר צלחת ב -400 סל"ד למשך 5 דקות. העבירו את ניירות המאגר והסינון לכוסות של מסנני צינור אצטט תאית בודדים.

צנטריפוגה את הדגימות כדי לאסוף את תמצית האף המסוננת בתחתית צינורות המיקרו-צנטריפוגה. לאחר מכן, הסר את הכוסות והניח את הצינורות על קרח. לאחר מכן, העבירו 150 מיקרוליטר של תמצית האף לבארות בודדות של צלחות אחסון קשורות חלבון נמוכות, ואחסנו את הצלחות בטמפרטורה שלילית של 80 מעלות צלזיוס עד לניתוח. לאחר מכן, מדוד את ריכוז המתווכים החיסוניים באף המעניינים על ידי מערך מרובה מבוסס אלקטרוכימילומינסנציה בעל רגישות גבוהה, על פי פרוטוקולי בדיקה סטנדרטיים.