ניטור הגעתם של חלבוני שטח מתויגים GFP לרשת טרנס-גולג'י באמצעות ננו-גופים פונקציונליים

התחל עם תאי סרטן נטולי סולפט המבטאים חלבון פני שטח מתויג GFP.

הוסף סולפט עם תווית רדיו וננו-גופים אנטי-GFP מותאמים - נוגדן חד-שרשרת הנושא מוטיב טירוזין-סולפטציה, ודגירה.

תאים נטולי סולפט מפנימים סולפטים עם תווית רדיו, ומשלבים אותם ברכיבים תאיים.

הננו-גוף האנטי-GFP נקשר לחלבון פני השטח המתויג ב-GFP ועובר אנדוציטוז לשלפוחית. שלפוחית זו מעבירה את קומפלקס החלבון הננו-גוף לאורך מסלולים תוך-תאיים ספציפיים, כולל רשת טרנס-גולגי, או TGN.

בתוך ה-TGN, הסולפוטרנספראז בנוכחות מצע מעביר סולפט רדיואקטיבי לשאריות טירוזין ספציפיות על הננו-גוף, ובכך מסמן אותו רדיו.

שטפו את התאים. לאחר מכן, ליז את התאים.

צנטריפוגה את הליזאט כדי להסיר פסולת תאית גדולה. בודד את הננו-גופים בשיטת טיהור מבוססת חרוזי ניקל.

טען את השבר המבודד על ג'ל SDS-PAGE כדי להפריד את הננו-גוף המסומן ברדיו לרצועות נפרדות.

הכניסו את הג'ל לאוטורדיוגרפיה.

האוטו-רדיוגרף שהתקבל חושף אזורים חשוכים, המעידים על נוכחות הננו-גוף המסומן ברדיו.

במכסה המנוע של תרבית תאים, זרעו בין 400,000 ל-500,000 תאי HeLa המבטאים ביציבות חלבון מדווח מתויג GFP לצלחות 35 מ"מ או אשכולות של 6 בארות, עם מדיום שלם המכיל אנטיביוטיקה. דגרו על התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 7.5% פחמן דו חמצני למשך הלילה. למחרת, הסר את המדיום השלם, ושטוף את התאים פעמיים עם 1X PBS בטמ