בדיקה לכימות פגוציטוזה בתיווך נוגדנים של אריתרוציטים נגועים בטפילים

קח אריתרוציטים נגועים בפלסמודיום פלציפרום. סמנו את הדנ"א של הטפיל בצבע פלואורסצנטי להדמיית טפילים.

דגרו על אריתרוציטים נגועים בטפילים אלה עם נסיוב מאנשים שנחשפו למלריה. תאים אלה מציגים אנטיגנים של טפילים על פני השטח שלהם, הנצמדים לנוגדני IgG אנושיים שנרכשו באופן טבעי בסרה, ומאפשרים תאים לפגוציטוזיס.

העבירו את האריתרוציטים הנגועים בטפיל האופסוני לצלחת מרובת בארות מצופה חלבון המכילה תרחיף של מונוציטים שמקורם בבני אדם - או תאים פגוציטים.

במהלך הדגירה, קולטני Fc-gamma על מונוציטים מקיימים אינטראקציה עם אריתרוציטים אופסוניים IgG, ומעוררים בליעה של אריתרוציטים לתוך פגוזומים.

לאחר הדגירה, צנטריפוגה את הצלחת כדי למנוע אינטראקציות תאיות נוספות ולעצור פגוציטוזיס.

השליכו את הסופרנטנט. לטפל בתמיסת אמוניום כלוריד, תוך קריעה סלקטיבית של אריתרוציטים נגועים שאינם פגוציטוזים מבלי להשפיע על מונוציטים.

הוסף מאגר המכיל סרום כדי לעצור את תהליך הליזינג. צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט המכיל אריתרוציטים ליזים.

השעו מחדש את המונוציטים במאגר.

בצע ציטומטריית זרימה כדי לכמת מונוציטים המציגים פלואורסצנטיות מהאריתרוציטים הנגועים בטפיל בתוכם, ומאשרים את הפגוציטוזיס המתווך נוגדנים שלהם.

התאם את תרחיף האריתרוציטים הנגוע המטוהר ב-3.3 פעמים 10 לתאים השביעיים למיליליטר במדיום תרבית טפילים המכיל אתידיום ברומיד לריכוז