בדיקת מבחנה לחקר ציטוטוקסיות של תאי T CD8+ מופעלים מראש נגד תאים סרטניים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:04 דק׳ • July 8th, 2025
קח שתי אוכלוסיות תאי CD8+ T: תאי CD8+ T אפקטורים המופעלים מראש באמצעות מעורבות בתיווך נוגדנים של תאי T וקולטנים לגירוי משותף ותאי CD8+ T מדוכאים המעוכבים על ידי תאים מדכאים שמקורם במיאלואיד.
הוסף תאי T אלה לבארות מצופות קרום מרתף עם תאים סרטניים המבטאים חלבון פלואורסצנטי מוגבל גרעיני.
פיפטה, מצע קספאז-3 פלואורוגני - צבע פלואורוגני קושר DNA המצומד לפפטיד המכיל אתר זיהוי קספאז-3.
דגירה. קולטני תאי T אפקטורים נקשרים לקומפלקס פפטיד MHC מסוג I על תאי הסרטן, מה שגורם לשחרור גרגירים ציטוטוקסיים המכילים פרפורינים וגרנזימים.
פרפורינים יוצרים נקבוביות של קרום התא הסרטני, ומאפשרים כניסת גרנזים והפעלת קספאז, ויוזמים אפופטוזיס.
קספזות מופעלות מבקעות בנוסף את מצע הקספאז הפלואורוגני, ומשחררות את הצבע שנקשר ל-DNA ולפלואורסצות.
תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, תאים סרטניים שגודלו יחד עם תאי T אפקטורים מציגים פלואורסצנטיות גרעינית כפולה, מה שמעיד על אפופטוזיס של תאי סרטן.
לעומת זאת, תאים סרטניים שגודלו בתרבית משותפת עם תאי T מדוכאים מציגים רק פלואורסצנטיות של חלבון גרעיני, מה שמרמז על תאים שאינם אפופטוטיים.
כדי להקים תרבית משותפת של תאי מטרה חיוביים ל-CD8 המופעלת מראש, ראשית, הוסף 30 מיקרוליטר של 1 עד 100 מטריצת ממברנת בסיס מסיסה מופחתת עם גורם גדילה מדולל לבארות המתאימות של צלחת תחתונה שטוחה של 96 בארות
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים