הערכת ההפעלה של קספזות מרובות במקרופאגים

התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה מקרופאגים שמקורם במח עצם דבוק.

הציגו נגיפי שפעת A המתמזגים עם מקרופאגים, ומשחררים ריבונוקלאופרוטאינים המכילים RNA נגיפי.

חלבון קושר Z-DNA 1 של המקרופאגים, או ZBP1, מקיים אינטראקציה עם ריבונוקלאופרוטאינים ויראליים, ומפעיל אוליגומריזציה של ZBP1, עם קינאזות וקספאז 8.

ה-ZBP1 האוליגומרי מגייס עוד יותר חלבוני חיישן דלקתיים, חלבוני מתאם ופרוקספאז-1, ויוצר קומפלקס מולטימרי - פנופטוזום.

בתוך ה-PANoptosome, היוזם caspase-8 מופעל באמצעות מחשוף קרבה, ומפעיל עוד יותר קספאזות אפקטור, כולל caspase-3 ו-7.

בנוסף, חלבוני חיישן הדלקת בתוך ה-PANoptosome מפעילים מפל איתות, וממירים פרו-קספאז-1 לצורתו הפעילה, קספאז-1.

במקביל, זיהום ויראלי גורם לשחרור ציטוכרום-c מהמיטוכונדריה, מפעיל הפעלת אפופטוזום וממיר פרו-קספאז-9 לצורתו הפעילה.

זיהום ויראלי מפעיל גם את המסלול הדלקתי הלא קנוני, ומפעיל את ה-caspase-11.

הכניסו מאגר ליזה כדי ליז את המקרופאגים; אספו את הליזאט וחממו אותו כדי לנטרל פרוטאזות, ולמנוע את פירוק הקספזות.

צנטריפוגה ולאסוף את הסופרנטנט המכיל קספזות מרובות לניתוח נוסף.

לאחר בידוד מח העצם, ובידול ה-BMDM, מדביקים את התאים בנגיף השפעת A. חשב את נפח הנגיף הדרוש בריבוי הדבקה של 20 יחידות יוצרות פלאק. הסר את המדיה מה-BMDM, ושטוף את התאים פעם אחת עם 500 מיקרוליטר PBS. הוסף 45