אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:46 דק׳ • July 8th, 2025
הוסף דגימות דמעות אנושיות וקוקטייל חרוזי נוגדנים לצלחת בדיקה שטופה.
הנוגדנים קשורים לחרוזים מגנטיים מקודדים בצבע, ספוגים בפרופורציות משתנות של פלואורופורים המתאימים לחתימות ספקטרליות מובהקות, מה שמקל על זיהוי ציטוקינים מרובים.
ציטוקיני הדמעות נקשרים לנוגדני הלכידה הקשורים לחרוזים המתאימים להם.
בעזרת מכונת כביסה מגנטית, יישב את מתחמי הנוגדנים-חרוזים. בעזרת חיץ, הסר את הביו-מולקולות הלא קשורות.
הוסף נוגדנים לזיהוי ביוטיניליים הנצמדים לציטוקינים הקשורים.
מצומד פיפטה סטרפטווידין-פיקואריתרין, הנקשר לנוגדנים הביוטיניליים.
בעזרת מכונת הכביסה של הצלחות, הסר את תכולת הבאר הלא קשורה. השעו מחדש את הקומפלקסים הקשורים לציטוקינים בנוזל הנדן.
במהלך ניתוח הדגימה, המערכת הנוזלית מעבירה את מתחמי החרוזים למכלול האופטיקה.
הלייזר הראשון מפעיל את צבעי החרוזים הפנימיים, כאשר האות המתקבל מזהה ציטוקינים ספציפיים.
הלייזר השני מפעיל את מולקולת המדווח הקשורה לקומפלקס החרוזים, שעוצמת האות שלה מייצגת את ריכוז הציטוקינים, ומאפשרת כימות בו זמנית של ציטוקינים מרובים.
כדי לבצע את בדיקת המולטיפלקס המבוססת על חרוזים, הביאו את כל הריאגנטים לטמפרטורת החדר, וסובבו אותם למשך חמש עד 10 שניות. אם דגימות דמעות שנפלטו אוחסנו במינוס 80 מעלות צלזיוס לפני הבדיקה, יש להפשיר את תמציות הדמעות הקפואות על קרח, ולצנטריפוגה את הדגימות
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים