בדיקה לגילוי פרץ חמצוני בדיסקיות עלי ארבידופסיס בעת האצה חיסונית

השג דיסקים של עלי Arabidopsis thaliana. טבלו אותם בבארות מיקרופלייט המכילות מים מזוקקים כפולים כדי למנוע התייבשות.

דגרו את הדיסקים כדי לאפשר החלמה מפציעה.

לאחר הדגירה, הסר את המים. הוסף תערובת תגובה המכילה פפטידים שמקורם בחיידקים, אנזים פרוקסידאז חזרת ולומינול.

בעזרת קורא מיקרו-פלטות, מדוד את הזוהר לאורך זמן.

קולטנים לזיהוי דפוסים, או PRRs, על תאי הצמח, קושרים את הפפטידים החיידקים, שהם דפוסים מולקולריים הקשורים לחיידקים.

יתר על כן, ה-PRR מתקשר לקולטן המשותף שלו, עובר זרחון הדדי, מפעיל קינאזות חלבון דמויות קולטן וגורם לזרם סידן תוך תאי.

זה, בתורו, מפעיל את הומולוג אוקסידאז פרץ הנשימה הטרנסממברני, או חלבוני RBOH.

RBOH מופעל מזרז את הייצור של מיני חמצן פעילים חוץ-תאיים, או ROS, הגורם להתפרצות חמצונית. יתר על כן, ROS מומר למי חמצן.

חזרת פרוקסידאז משתמשת במי חמצן כדי לחמצן לומינול למצב נרגש, ופולטת זוהר עם החזרה למצב הקרקע.

מדוד את הזוהר כדי לנטר את התפרצות החמצון המהירה לאחר זיהוי דפוס מיקרוביאלי.

4 עד 5 שבועות לאחר הנביטה, השתמש באגרוף ביופסיה חד של 4 מילימטר כדי להסיר דיסק עלה אחד לכל צמח Arabidopsis, הימנע מאמצע הווריד והקפד להגביל את הפציעה. אסוף את הדיסקים לבארות בודדות של צלחת לומינומטר של 96 בארות שאינה בשימוש המכילה 100 מיקרוליטר מים מזוקקים כפולים לבאר בצד הצירי כלפי מעלה כדי