מדידת אלורטיאקטיביות באוכלוסייה מעורבת של תאי T

התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה תאים דנדריטיים של עכברים, או DCs הנושאים אלואנטיגנים או וריאנטים גנטיים של אנטיגנים עצמיים.

הכנסת תאי T של עכברים, כולל תאי T אלוראקטיביים שאינם מגיבים לאנטיגנים עצמיים, תוך זיהוי אנטיגנים זרים.

תאי ה-T האלוראקטיביים מזהים את האלואנטיגנים הללו ומקיימים אינטראקציה עם DCs, מה שמפעיל סידור מחדש של שלד התא, כולל ארגון מחדש של F-actin.

זה מקדם קולטנים על תאי T לעסוק במולקולות מעוררות ב-DCs, ויוצרים חיבור תאי - סינפסה אימונולוגית.

תקן את התאים, העביר אותם לצינור והכנס קוקטייל של נוגדנים המסומנים בפלואורוכרום ספציפיים לקולטני תאי T ו-DC, המעניקים פלואורסצנטיות מובהקת.

הסר נוגדנים לא קשורים והשהה מחדש את התאים במאגר המכיל חומר חודר המחלחל לתאים וסמני חלבון ירוקים המתויגים בפלואורופור הנקשרים ל-F-אקטין.

צנטריפוגה ותשעה מחדש את התאים במאגר המכיל צבע גרעיני, ומכתים את הגרעינים באדום.

באמצעות ציטומטריית זרימת הדמיה, זהה את הכפילים - המתאימים לתאי T ומצומדים DC עם כוונת ירוקה של F-actin - המאשרים היווצרות סינפסות.

כמת את הכפילים המייצגים את מידת הפעילות.

התחל בזריעה של 0.5 פעמים 10 לתאים הדנדריטים השישיים לכל באר של צלחת תרבית תאים של 96 בארות, ואחריה 1 כפול 10 לתאי T השישיים בנפח סופי של עד 50 מיקרוליטר בסך הכל של מדיום תרבית לבאר. דגרו על התרביות הקרות במשך ארב