בדיקת אגר פחם רזזורין להערכת פעילות תרכובת הבדיקה כנגד מיקובקטריות

קח צלחת מרובת בארות המכילה מיקובקטריה. הוסף ריכוזי תרכובות בדיקה הולכים וגדלים לבארות.

דגירה. בהתאם לפעולת התרכובת על מיקובקטריה, היא יכולה לעכב צמיחה מיקובקטריאלית, להציג פעילות בקטריוסטטית, או לחסל מיקובקטריה, מה שמדגים פעילות חיידקית.

העבירו היטב את הכמות לבדיקת אגר פחם רזזורין, או CARA, מיקרו-פלטה המכילה אגר עם פחם פעיל כדי לספוג את תרכובת הבדיקה, ולמנוע השפעות העברה.

דגירה. הפעילות הבקטריוסטטית של התרכובת מעכבת שכפול מיקובקטריאלי, בעוד שפעילות חיידקים מפחיתה את הכדאיות המיקובקטריאלית.

הוסף חיץ, רזזורין וחומר פעילי שטח לא יוני כדי לפזר רזזורין בבארות.

במיקובקטריות הפעילות מטבולית, הדהידרוגנאזות מצמצמות את הרסזורין בצבע כחול ופלואורסצנטי חלש לרסורופינה ורודה

.

בעזרת קורא מיקרו-פלטות, מדוד את הקרינה של רסורופין בבארות.

בארות חסרות פלואורסצנטיות של רסורופין מצביעה על פעילות חיידקית של התרכובת.

עוצמת הקרינה המשתנה על פני בארות מצביעה על עומס החיידקים החיים, המשקף את העוצמה החיידקית או הבקטריוסטטית התלויה בריכוז של תרכובות הבדיקה.

חסנו צינורות צנטריפוגה עגולים או חרוטיים מפוליפרופילן המכילים 4 או 20 מיליליטר בהתאמה של Middlebrook 7H9-ADN, או 7H9-OADC עם M. smegmatis ב-OD₅₈₀ של 0.01 עד 0.1. דגרו על תרביות M. smegmatis ב-37 מעלות צלזיוס ו-20% O₂ עם טלטול, והרחיבו את התרביות לשלב אמצע ה