אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:54 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת מרובת בארות המכילה פיברובלסטים של עכברים במדיה נטולת סרום. הוסף דילולים סדרתיים של נוגדנים ספציפיים ל-TNFα.
הוסף TNFα - ציטוקין דלקתי.
דגירה. מחסור בסרום גורם ללחץ תאי, מה שהופך את התאים לרגישים לאפופטוזיס בתיווך TNFα.
TNFα נקשר לקולטנים שלו על התאים חסרי הסרום מפעיל מפלי איתות תוך תאיים, מפעיל את מפל הקספאז וגורם לאפופטוזיס.
עם זאת, קשירת נוגדנים ל-TNFα מונעת את קשירת הקולטן שלו, ומעכבת את הפעלת הקספאז.
לאחר הדגירה, הוסף תערובת ריאגנטים המכילה חומר ניקוי, מצע קספאז זוהר ואנזים לוציפראז יחד עם יוני ATP ומגנזיום. מערבבים ודוגרים.
חומר הניקוי מחלחל לממברנות, ומשחרר קספזות מתאים המושרים על ידי TNFα.
המצע הביולוגי מכיל אתר זיהוי קספאז. קספזות ספציפיות מבקעות את המצע ומייצרות אמינולוציפרין.
לוציפראז מחמצן את המצע שלו, אמינולוציפרין, וכתוצאה מכך פליטת אור.
למדוד את עוצמת הזוהר כדי לזהות ירידה בזוהר עם עלייה בריכוזי הנוגדנים, מה שמצביע על העוצמה של הנוגדנים הספציפיים של TNFα לנטרול TNFα ומניעת אפופטוזיס המושרה על ידי TNFα.
הוסף 50 מיקרוליטר של תרחיף תאים ל-60 הבארות הפנימיות של לוחית הבדיקה, החל מהעמודה 2 ועד ה-11. מערבבים תרחיף תאים על ידי פיפטינג כדי להוסיף אליציטוטים למיקרופלייט. מיד, העבירו 50 מיקרוליטר מהדילולים הממופים ללוחית הבדיקה.
עבור נתיבים מקבילים, חלק דילולים על ידי ס
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים