בדיקה מבוססת זרימה למינרית לחקר האינטראקציות בין לויקוציטים ותאי אנדותל

התחל בהנחת שקופית זכוכית עם חד-שכבת אנדותל מגורה ציטוקין דביקה לתוך תא זרימה.

תאי אנדותל אלה מבטאים מולקולות הידבקות פני השטח, כגון סלקטינים, ואותות נדידה הקשורים לאנדותל, כמו כימוקינים.

הכניסו לויקוציטים עם תווית פלואורסצנטית לתא הזרימה.

כאשר לויקוציטים זורמים מעל השכבה החד-שכבתית של האנדותל, הם מתקשרים עם תאי אנדותל מופעלים.

סלקטינים על תאי אנדותל נקשרים לליגנדים המתאימים להם על הלויקוציטים.

אינטראקציות סלקטין-ליגנד הן חלשות וחולפות, ומאפשרות ללויקוציטים להתגלגל לאורך שכבת האנדותל בכוח של תווך זורם.

גלגול מאפשר ללויקוציטים לקיים אינטראקציה עם כימוקינים, להפעיל אינטגרינים ולקדם מעצר לויקוציטים מוצקים.

לאחר מכן, לויקוציטים התפשטו על פני השכבה החד-שכבתית של האנדותל, מה שמסמן את פוטנציאל הגלגול שלהם, שלב מכריע בתגובה החיסונית.

בדיקה זו עוזרת לחקור את מנגנון ההדבקה, הדה-הידבקות וההעברה של לויקוציטים תוך החדרתם על תאי אנדותל.

השתמש במיקרוטולר אחד של כתם חומצת גרעין פלואורסצנטית ירוקה כדי לתייג באופן פלואורסצנטי את הלויקוציטים. לאחר התיוג יש לדגור על הלויקוציטים למשך 30 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, צנטריפוגה את התאים ב-300 פעמים גרם למשך 5 דקות כדי לגלול את התאים.

השעו מחדש במי מלח עם חוצץ פוספט כדי לשטוף את התאים. לאחר מכן, צנטריפוגה את התאים ב -300 פעמים גרם למשך 5 דקות. בה