אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:14 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת מרובת בארות המכילה מודל מבוסס של Mycobacterium tuberculosis או Mtb.
הבארות מכילות אגרגטים של תאים המרכיבים ליבה של מקרופאגים נמקיים נגועים ב-Mtb ו-Mtb צפופים, מוקפים במקרופאגים לא נגועים - המחקים זיהום in vivo.
קח דילול סדרתי של האנטיביוטיקה ריפמפיצין ומוקסיפלוקסצין.
השליכו מדיה מצלחת הזיהום, העבירו דילולים אנטיביוטיים לבארות ודגרו.
האנטיביוטיקה מתפזרת דרך מצברי התאים ונכנסת לתאי החיידקים.
ריפמפיצין קושר רנ"א פולימראז חיידקי, מעכב סינתזת רנ"א וגורם למוות של חיידקים.
מוקסיפלוקסצין קושר DNA חיידקי טופואיזומראז, מעכב שכפול ועוצר צמיחת חיידקים. הקישור גם גורם לתגובות לחץ, כולל הצטברות של מיני חמצן תגובתיים, והורגים את החיידקים.
לאחר הדגירה, הוסף רזזורין - אינדיקטור חמצון חיזור. בתוך חיידקים חיים ופעילים מטבולית, האנזים אוקסידורדוקטאז מפחית רזזורין כחול לרסורופינה פלואורסצנטית ורודה.
מדוד את הקרינה כדי לזהות חיידקים ברי קיימא.
הישרדות החיידקים פוחתת עם הגדלת ריכוז האנטיביוטיקה, ומציגה את יעילותם נגד Mtb.
לבדיקת סמים, הכינו שתי תרופות נגד שחפת בשלוש פעמים על צלחת חדשה של 96 בארות כדלקמן. ראשית, הוסף 125 מיקרוליטר של מדיום 7H9-C לבארות B2 עד G10. לאחר מכן, הכינו את שתי התרופות בכפול מהריכוז הסופי הגבוה ביותר הרצוי במיליליטר אחד של 7H9-C.
בעזרת פיפטה, הוסף 250 מיקרוליטר מכל תרופה ל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים