בדיקה חוץ גופית לבחינת שיפור תלוי נוגדנים של זיהום ויראלי

קח מיקרופלייט עם דילולים סדרתיים של דגימת סרום המכילה נוגדנים נגד נגיף הזיקה.

הוסף חלקיקי וירוס מדווח דנגי או RVPs, ודגירה.

ה-RVPs המהונדסים מורכבים ממעטפת עם חלבונים מבניים ונוקלאוקפסיד המכיל RNA גנומי, המקודד חלבון פלואורסצנטי.

ההומולוגיה המבנית של חלבוני המעטפת של נגיפי דנגי וזיקה גורמת לנוגדנים להגיב עם ה-RVPs, וליצור קומפלקס.

הוסף תאי לוקמיה אנושיים שאינם מותרים לזיהום על ידי RVPs.

לתאים יש קולטני Fc המזהים את הנוגדנים הקשורים ל-RVP, מה שמקל על כניסת RVPs לאנדוזומים - המכונה שיפור תלוי נוגדנים או ADE.

גלולה את התאים והשליך את הסופרנטנט המכיל RVPs לא מופנמים. הוסף מצע גידול ודגירה.

ההיתוך התלוי ב-pH של RVP וממברנות אנדוזומליות משחרר את הנוקלאוקפסיד, שמתפרק לשחרור RNA גנומי, ומאפשר ביטוי חלבון פלואורסצנטי.

תקן את התאים ונתח אותם באמצעות ציטומטריית זרימה.

פלואורסצנטיות גבוהה יותר בריכוז נוגדנים מתאים מייצגת הפנמה מוגברת של RVP, מה שמעיד על זיהום מוגבר.

התחל בהפשרת דגימות הסרום בטמפרטורת החדר. לאחר ההפשרה, העבירו 100 מיקרוליטר מכל דגימת סרום לצינור סטרילי והפעילו את החום למשך 30 דקות בטמפרטורה של 56 מעלות צלזיוס.

לאחר מכן, בצע דילולים סדרתיים פי 10 של דגימת הסרום הנעים בין 1 ל-1 עד 1,000 ב-RPMI-10 קר. לאחר מכן העבירו 10 מיקרוליטר מכל דגימת סרום מדוללת לבארות של צלחת סטרילית של 96