בדיקה לסינון ננו-חלקיקים ביו-אקטיביים לעיכוב איתות קולטן דמוי אגרה

קח צלחת מרובת בארות עם מקרופאגים מדווחים שונים המכילים את הפוספטאז האלקליין העוברי המופרש, או SEAP, גן או גן לוציפראז המופרש תחת מקדמים הניתנים להשראה.

הוסף מדיה המכילה הכלאות שונות של ננו-חלקיקי פפטיד-זהב מעורבבים עם ליפופוליסכרידים או LPS לבארות ייעודיות.

LPS נקשר לקולטנים דמויי אגרה של מקרופאגים, או TLR, ומפעיל הפנמה לאנדוזום.

משאבת הפרוטונים האנדוזומלית מעבירה פרוטונים פנימה. ההחמצה מפעילה איתות TLR, ומפעילה גורמי שעתוק.

גורמים אלה גורמים לביטוי הגנים המדווחים, ומייצרים SEAP או לוציפראז.

לחלופין, הפנמה של LPS יחד עם ההיברידיות גורמת לקבוצות הפפטידים הטעונות שלילית ללכוד פרוטונים לומינליים, למנוע החמצה אנדוזומלית ולעכב איתות TLR.

אסוף את המדיה, הצנטריפוגה כדי להפריד את הסופרנטנט, והוסף מצעים ל-SEAP ולוציפראז.

SEAP ממיר את המצע שלו למוצר צבעוני, בעוד שלוציפראז מזרז את המצע שלו כדי לייצר זוהר.

הפחתה באותות המדווחים מצביעה על יעילות ההיברידיות בעיכוב איתות TLR.

צנטריפוגה 20 נפחים של התמיסה ההיברידית פפטיד-GNP בצינורות אפנדורף של 1.5 מיליליטר ב-18,000 פעמים גרם למשך 30 דקות. השליכו בזהירות את הסופרנטנטים. העבירו את ההיברידיות לצינור טרי אחד, ושטפו אותם פעמיים עם 1 מיליליטר PBS. לאחר מכן, השעו מחדש את הכלאיים השטופים בנפח אחד של מדיום R10. מערבבים נפחים שווים של הכלאיים המרוכזים והמד