בדיקת מיקוד לכימות טיטרים של וירוסים באיברים של עכבר נגוע

קח צלחת מרובת בארות המכילה שכבה אחת של תאי יונקים.

לחסן את הבארות בדילולים סדרתיים של רקמות הומוגניות המכילות את נגיף הזיקה, שמקורן באיברים שונים של עכבר נגוע.

עם הכניסה לתאים באמצעות אנדוציטוזיס, הנגיף מתרבה ומדביק תאים שכנים.

שכבה עם תמיסת מתיל צלולוז בעלת צמיגות גבוהה, היוצרת מחסום פיזי המגביל את תנועת הנגיף.

המחסום מאפשר רק הדבקה של תאים שכנים מיידיים, ויוצר מוקדים של תאים נגועים, ומבטיח שכל מוקד מקורו בחלקיק נגיף בודד, מה שמאפשר כימות מדויק.

תקן את התאים וחלחל את הממברנה. הוסף נוגדנים ראשוניים שנכנסים לתאים ומקיימים אינטראקציה עם האנטיגן הנגיפי.

הציגו נוגדן משני מצומד פרוקסידאז שנקשר לנוגדנים הראשוניים.

הוסף מצע כרומוגני המומר על ידי פרוקסידאז ליצירת כתמים צבעוניים, המציין את המוקדים של תאים נגועים.

ספרו את המוקדים כדי לכמת את טיטר הנגיף באיברים השונים של העכבר.

מוציאים את הדגימות ההומוגניות מהמקפיא במינוס 80 מעלות צלזיוס ומניחים להן להפשיר. כשהדגימות מונחות על קרח, יש לדלל את נגיף הזיקה פי 10 לבאר הראשונה של צלחת הדילול, ולהשתמש בפיפטה רב-ערוצית כדי לבצע דילול סדרתי פי 10 במורד הצלחת, תוך שינוי קצוות בכל פעם על ידי הוספת 20 מיקרוליטר של דגימה ל-180 מיקרוליטר של מצע גידול.

החלף את קצות הפיפטה בין כל דילול. הכן את הצלחת היוצרת מיקוד על ידי הסרת המדיה מהצלחת המוכנה עם תחתית שטוח