ההשפעות של לחץ גזירה על טסיות שטופלו בנוגדנים נגד קולטנים מכנו-סנסוריים

התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה פלזמה עשירה בטסיות. טסיות הדם מבטאות קומפלקסים של קולטנים מכניים על פני השטח - מגיבים לגירויים מכניים.

קומפלקס הקולטנים המכניים מכיל את תחום קשירת הליגנד החוץ-תאי ואת אזור המקרו-גליקופפטיד המקושר לתחום המכנו-חושי.

הציגו נוגדנים נגד קולטנים מכניים, צולבים עם תחומי קשירת הליגנדים של הקולטנים על טסיות דם מנוגדות.

הנח טיפה של תרחיף הפלזמה שטופל בנוגדנים בין מכלולי הצמיג.

הפעל מתח גזירה, המדמה כוח מכני, מושך את הקולטנים הקשורים לנוגדנים הרחק מהטסיות, מה שמוביל לדיסוציאציה של אזור מקרו-גליקופפטיד מהתחום המכנו-חושי.

זה מעורר שינוי קונפורמציה בתחום המכנו-חושי, מפעיל טסיות דם וכתוצאה מכך ביטוי של סמני פני השטח.

העבר את מתלה הטסיות הגזוז לבאר חדשה בתוך הצלחת מרובת הבארות.

הציגו קוקטייל של מולקולות ספציפיות לסמן פלואורופור המקיימות אינטראקציה עם סמני פני השטח המתאימים של טסיות הדם וקבעו את התאים בתמיסה מקבעת.

בציטומטריית זרימה, אותות פלואורסצנטיים מובהקים מתאמים עם ההשפעות של מתח גזירה על טסיות דם שטופלו בנוגדנים.

לטיפול בליגנד, לאט לאט, הוסיפו את הנוגדן או הליגנד המעניין לפלזמה העשירה בטסיות, וערבבו את הטסיות בעדינות. במהלך הדגירה, הפעל את מד הצמיגות של צלחת החרוט והגדר את טמפרטורת הצלחת ל-22 מעלות צלזיוס. לאחר 5 עד 10 דקות, העבירו את הפלזמה העשירה בטסיות הדם המטופלות אל מד הצמיגות של לוחית החרוט המבוקרת בטמפרטורה ישירות במרכז הצלחת, תוך הקפדה שכל הדגימה תופקד בין החרוט לצלחת בנקודת המגע.

כדי להחיל גזירה על הדגימה, חשב את הגזירה לפי מדריך הצמיגות, והחל גזירה על הדגימה בקצב ומשך הזמן המתאימים. בתום היישום, הרם את החרוט כ-2 מילימטרים מהצלחת, כך שהדגימה תישאר במגע הן עם הצלחת והן עם החרוט, והשתמש בקצה פיפטה טעון ג'ל כדי לאסוף 5 עד 10 מיקרוליטר ממרכז נפח הדגימה. לאחר מכן, דגרו את הדגימה הגזורה עם נוגדנים כנגד סמני פני השטח המעניינים למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר, וקבעו את הדגימות ב-2% פרפורמלדהיד למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר.

כדי לנתח את הדגימות לפי ציטומטריית זרימה, אסוף לפחות 20,000 אירועים עבור כל מצב, וכימת את עוצמת האות של כל סמן פלואורסצנטי באמצעות ערך הגובה עבור העוצמה של כל פלואורופור. לאחר מכן, השתמש בבקרה שלילית עם אלבומין או רכב בסרום בקר כדי לצייר שער למעט אירועי פלואורסצנט שליליים ברקע, ולכמת את אחוז האירועים בתוך השער עבור כל תנאי הניסוי.