בדיקת צלחת נקודתית להערכת תגובות עקה חמצונית בזני חיידקים

טפל גם בזני חיידקים פיומלנין וגם בזני חיידקים שאינם מייצרים פיומלנין עם חומר בדיקה.

פיומלנין, פיגמנט חוץ-תאי, מספק הגנה מפני עקה חמצונית.

חומר הבדיקה משבש את הביוסינתזה של פיומלנין, ומפחית את ייצורו.

לאחר הדגירה, בצע דילול חיידקים סדרתי עם מאגר המכיל את חומר הבדיקה או ממס הרכב.

זיהוי דילול חיידקים על לוחות אגר עם ריכוזי מי חמצן משתנים - גורם לחץ חמצוני.

צלחות חסרות מי חמצן משמשות כבקרות.

דגירה. בצלחות בקרה, חיידקים יוצרים מושבות.

בזן המייצר פיומלנין שלא טופל, פיומלנין מגן על חיידקים מפני נזק חמצוני הנגרם על ידי מי חמצן, וכתוצאה מכך מושבות פיגמנטיות.

עם זאת, הזן המייצר פיומלנין שטופל בחומר הבדיקה, המציג פיומלנין מופחת, הופך לרגיש לעקה חמצונית, וכתוצאה מכך מוות של חיידקים.

ספור מושבות.

ספירת המושבה וגודלה המופחתת עם עלייה בריכוזי מי חמצן בזנים המטופלים המייצרים פיומלנין וגם מטופלים ולא מטופלים שאינם מייצרים פיומלנין מאשר בקרות מצביעים על רגישות מוגברת של חיידקים לעקה חמצונית.

כדי להתחיל בהליך זה, הגדר תרביות לילה של הזנים שייבדקו ב-LB, עם ובלי NTBC. למחרת, הכינו צלחות אגר LB המכילות מי חמצן כגורם לחץ חמצוני. ראשית, ממיסים את צלוחיות האגר LB ומקררים את המדיה לכ- 50 מעלות צלזיוס בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן, הוסף מי חמצן ישירות למדיה המקוררת בריכוזים הרצויים. סובבו את הבקבוק לערבוב. טווח ש