אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:17 דק׳ • July 8th, 2025
קח תוספת ממברנה המכילה חד-שכבת אפיתל מוקרנת רנטגן.
הנח את תוספת הממברנה לבאר המכילה תאים חד-גרעיניים בדם היקפי, או PBMCs - תאים חיסוניים המפרישים ציטוקינים ומולקולות איתות אחרות.
הנח את ההתנגדות החשמלית הטרנס-אפיתלית, או אלקטרודות TEER, לתוך תוספת הממברנה.
הפעל זרם חשמלי קטן ומדוד את ההתנגדות כדי להעריך חדירות חד-שכבתית המווסתת על ידי צמתים הדוקים.
צמתים הדוקים הם חלבונים טרנסממברניים המקושרים לשלד הציטו באמצעות חלבוני פיגומים.
יחד, חלבוני הצומת הללו יוצרים מחסום חזק בין קרומי התאים, ומגבילים את המעבר של מולקולות גדולות ופתוגנים.
חלבוני צומת שלמים מעכבים את זרימת הזרם החשמלי, וכתוצאה מכך TEER גבוה, המעיד על חדירות חד-שכבתית רגילה.
חשיפה לקרני רנטגן מפחיתה את רמות החלבון הצומת, מגבירה את החדירות החד-שכבתית ומורידה את ה-TEER.
יתר על כן, מולקולות איתות מתאים מוקרנים מפעילות PBMCs בתרבית משותפת המשחררים ציטוקינים, מה שגורם לירידה נוספת ברמות החלבון הצומתי ומשבש את שלמות המחסום.
כתוצאה מכך, חדירות חד-שכבתית עולה, וגורמת לירידה נוספת ב-TEER.
כדי להעריך את ההתנגדות החשמלית הטרנס-אפיתלית, או TEER, של תאי Caco-2 מיד לאחר ההקרנה, העבירו מחצית מתרבית תאי Caco-2 לתוך צלחת חדשה עם 3 מיליליטר של מדיום שלם טרי בכל באר, ומחצית מתרביות ההכנסה לצלחת חדשה עם 2 x 106 PBMC לכל 3 מיליליטר של מדיום שלם ל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים