בדיקת ביופילם של צלחת יתד להקרנת חומרים אנטיבקטריאליים

קח צלחת מיקרוטיטר עם מכסה עם תומכים גליליים, או יתדות, מצופים בביופילמים של חיידקים.

הנח את מכסה היתד המצופה ביופילם על בארות צלחת מיקרוטיטר עם חיץ כדי לחסל חיידקים מחוברים באופן רופף או פלנקטוניים, תוך התמקדות במדידות המחוברות לביופילם.

העבר את מכסה היתד המצופה ביופילם שטוף לצלחת אתגר עם ריכוזי חומרים אנטיבקטריאליים הולכים וגדלים. לדגור בלי לרעוד.

בהתאם לריכוז הסוכן ולפוטנציאל האנטיבקטריאלי, הוא משבש את הפעילות המטבולית של החיידקים ואת שלמות הביופילם.

לאחר הדגירה, הנח את מכסה היתד על בארות צלחת המכילות חיץ כדי להסיר חיידקים פלנקטוניים.

העבירו אותו לבארות צלחת מיקרוטיטר עם מדיום התאוששות ביופילם המכיל רזזורין, צבע פלואורסצנטי חדיר לתאים חלש. דגירה.

בחיידקים פעילים מטבולית, אנזימי דהידרוגנאז מפחיתים רזזורין בצבע כחול לרסורופין פלואורסצנטי בצבע ורוד.

היעדר המרה של רזזורין מעיד על חיסול ביופילם, בעוד שההמרה לרסורופינה מרמזת על נוכחות של תאים ברי קיימא.

ריכוז החומר האנטיבקטריאלי הנמוך ביותר בבדיקה שאינו מניב המרת רזזורין מציין את הריכוז המינימלי של חיסול ביופילם.

קח צלחת טרייה של 96 בארות, והוסף 100 מיקרוליטר CRPMI מאוזן לטמפרטורת החדר לכל באר של שורות B עד H. לדלל עד ארבע תרכובות בדיקה בנפרד ב-1.0 מיליליטר CRPMI עד פי 2 מהריכוז הסופי הרצוי. הוסף 200 מיקרוליטר של תרכובת אחת בבארות A1 ע