אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:34 דק׳ • July 8th, 2025
קח מיקרו-צלחת המכילה תאי יונקים על קרח.
הוסף מדיום המכיל סידן לבארות נבחרות ומדיום ללא סידן לאחרים.
הציגו מונומרים של רעלן חיידקי היוצר נקבוביות. טמפרטורה נמוכה מונעת הצטברות מונומר, מה שמקל על הקישור לכולסטרול בקרום התא.
דגירה בטמפרטורה פיזיולוגית, מה שמאפשר למונומרים הקשורים לכולסטרול לעשות אוליגומריזציה ולהכניס לתוך הממברנה, וליצור נקבוביות.
בבארות עם סידן חוץ-תאי, הנקבוביות גורמות לזרם סידן.
הזרם מעורר נשירה אקסוזומלית של הרעלן ואיטום מחדש של הממברנה.
עליית הסידן התוך תאית גורמת גם לאקסוציטוזיס ליזוזומלי, ומשחררת אנזים הממיר את הספינגומיאלין של הממברנה לסרמיד.
הממברנה המועשרת בסרמיד מפעילה אנדוציטוזיס רעלן, ואוטמת מחדש את הממברנה.
איטום מחדש של הממברנה מונע בבארות ללא סידן חוץ-תאי.
הוסף פרופידיום יודיד או PI - צבע פלואורסצנטי - שאינו יכול להיכנס לתאים עם ממברנה מתוקנת אך נכנס לתאים פגומים כדי לקשור DNA, ופולט פלואורסצנטיות.
מדוד את הקרינה במרווחים מוגדרים כדי להעריך את יעילות האיטום מחדש של הממברנה.
כדי להגדיר בדיקה מבוססת פלואורסצנטיות בתפוקה גבוהה לתנאי התיקון המתירניים, שטפו את התאים פעמיים עם 200 מיקרוליטר של 37 מעלות צלזיוס M1 בינוני לבאר, והוסיפו 100 מיקרוליטר של מדיום טרי 37 מעלות צלזיוס M1 בתוספת 30 מיקרו-מולרי פרופידיום יודיד לאחר השלכת הכביסה השנייה.
לתנאים מגבילים לת
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים