מכתים אימונוהיסטוכימיים לזיהוי אנטיגנים של נגיף הכלבת

התחל עם שקופית הנושאת קטע רקמת מוח של עכבר נגוע בנגיף הכלבת המקובע בפורמלין, משובץ בפרפין. החלק הקבוע שומר על אנטיגנים נגיפיים באמצעות קישור צולב של חלבון.

טפל בשקופית בתמיסת קסילן להסרת הפרפין.

טבלו את המגלשה בריכוזי אתנול יורדים כדי להחזיר לחות לרקמה, מה שהופך אותה לתואמת לתמיסות מימיות.

הציגו חוצץ המכיל פרוטאז כדי לשבש קישורים צולבים של חלבונים, ולשפר את הנגישות לאנטיגן.

טבלו במי חמצן כדי לחסום פרוקסידאזות אנדוגניות, ומרחו תמיסת חסימה למניעת אינטראקציות לא ספציפיות.

הכנס נוגדנים ראשוניים ספציפיים לאנטיגן הכלבת, ויוצר קומפלקסים של אנטיגן-נוגדנים.

הוסף נוגדנים משניים ביוטיניליים, הנקשרים לנוגדנים הראשוניים. דגירה עם אנזימי פרוקסידאז מצומדים לסטרפטווידין, המקיימים אינטראקציה עם ביוטין.

הכנס מצע פרוקסידאז, המייצר משקע אדום-מג'נטה.

מכתים את הרקמה בכתם גרעיני, ואחריו חומר מכחלחל, מכתים את הגרעינים בכחול.

התמונה האימונוהיסטוכימית חושפת כתמים אדומים מג'נטה בציטופלזמה, המאשרים את נוכחותם של אנטיגנים לכלבת בקטע הרקמה.

בעזרת מיקרוטום יוצרים קטע פרפין בגודל 5 מיקרומטר. צף את החלק על אמבט מים ב-38 מעלות צלזיוס, ואסוף אותו על מגלשות זכוכית. סמן את השקופיות עם עט עמיד בפני ריאגנטים. מניחים את השקופיות על מגש, וממיסים בתנור בחום של 55 עד 60 מעלות צלזיוס למשך שעה.

לאחר מכן, הוציאו את השקופיות מה