אימונוהיסטוכימיה לחקר הקשר בין מקרופאגים ותאי חיסון חדירתיים

התחל עם שקופית המכילה קטעי ביופסיה של העורקים הטמפורליים קבועים בפורמלין, נטולי פרפינים והתייבשות עם תאי חיסון חודרים, כולל לימפוציטים ומקרופאגים.

מקרופאגים מופעלים מבטאים קולטן חומצה פולית בטא או FR-β - סמן הקשור למחלה, המבדיל את המקרופאגים מתאי חיסון אחרים.

העבר את השקופית למאגר מחומם מראש כדי לאחזר קולטני פני השטח.

טפל בקטע במי חמצן, וחוסם את פעילות הפרוקסידאז התוך-תאית.

הציגו תערובת של נוגדנים ראשוניים המכוונים ל-CD3, CD68 ו-FR-β, הנקשרים לתאים חיסוניים המבטאים חלבונים אלה.

הוסף נוגדנים משניים ביוטיניליים, אינטראקציה עם נוגדנים ראשוניים ושטוף.

שכבה עם אנזימים מצומדים סטרפטווידין הנקשרים לביוטין.

טפל במצע כרומוגני המקיים אינטראקציה עם אנזימים, ומייצר משקעים חומים מקומיים.

הכניסו כתם נגדי - המטוקסילין, מכתים את הגרעינים בכחול.

זיהוי מיקרוסקופי של תאים קטנים, עגולים ומוכתמים בחום כלימפוציטים המבטאים CD3 ותאים גדולים, לא סדירים ומוכתמים בחום כמקרופאגים המבטאים CD68 ו-FR-β.

כמת את המקרופאגים בקטע כדי למצוא את היחס שלהם בין סך תאי החיסון שחדרו.

לאחזור אנטיגן, העבירו את המתלה למיכל זכוכית עם 200 מיקרוליטר של 95 מעלות צלזיוס, 10 מילימולר לליטר, מאגר ציטראט למשך 30 דקות. בתום הדגירה, הניחו למגלשות להתקרר לטמפרטורת החדר למשך 20 דקות לפני שטיפה במים זורמים למשך חמש דקות.

כדי להסיר את פעיל