אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 6:20 דק׳ • July 8th, 2025
קח תאי איברי לימפה משניים מעכבר מחוסן אנטיגן, המכיל תאי CD8+ T ספציפיים לאנטיגן בשלבים שונים של מחזור התא.
G1, S, G2 ו-M הם שלבים של חלוקה פעילה של תאים, בעוד שתאים בשלב G0 שקטים.
הוסף צבע כדאיות פלואורסצנטי לסימון תאים מתים, ונוגדנים מתויגים פלואורופור הנקשרים לסמני פני השטח של תאי T CD3 ו-CD8.
הציגו מולטימרים של פפטיד-MHC אנטיגניים מצומדים פלואורופור כדי לקשור קולטנים של תאי T, ולסמן את תאי ה-T הספציפיים לאנטיגן.
בעזרת מאגר, תקן וחלחל את התאים.
הציגו נוגדנים מתויגים פלואורופור כדי לקשור חלבון גרעיני הקשור להפצת תאים - לצבוע את התאים המתחלקים באופן פעיל.
הוסף כתם פלואורסצנטי לתווית DNA.
באמצעות ציטומטריית זרימה, בחר את התאים החיים וזהה את תאי CD8+ T הספציפיים לאנטיגן באמצעות התוויות הקשורות לפני השטח.
עוצמת כתם ה-DNA מבחינה בין תאי G0 ו-G1 עם כמות DNA נמוכה יותר מתאי S, G2 ו-M עם כמות DNA גבוהה יותר. היעדר הנוגדן הספציפי לחלבון הגרעיני מפריד בין תאי G0.
הכן מאגר כביסה טרי של 1X על ידי דילול מאגר חדירות פי 10 במים מזוקקים, וסנן אותו דרך מסנן של 0.45 מיקרומטר כדי לחסל אגרגטים. דילול נוגדן חד שבטי Ki67-FITC במאגר שטיפת חדירות 1X כפי שנקבע בניסוי טיטרציה לנפח סופי של 100 מיקרוליטר לדגימה.
הוסף 3 מיליליטר של מאגר שטיפת החדירות 1X לכל צינור עם תאים וצנטריפוגה ב-400 גרם למשך 5 דקות בטמפר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים