בדיקת ציטומטריית זרימה לזיהוי תת-קבוצות של תאי חיסון בתאים חד-גרעיניים היקפיים בדם

קח תאים חד-גרעיניים בדם היקפי או PBMCs, אוכלוסיית תאים מעורבת הכוללת לימפוציטים ומונוציטים.

הוסף צבע כדאיות פלואורסצנטי כדי להבחין בין תאים מתים, וקוקטייל נוגדנים עם תווית פלואורסצנטית לזיהוי סוגי תאים שונים.

הנוגדנים המצומדים פלואורוכרום A נקשרים לסמנים על פני השטח - CD3 על תאי T, קולטן תאי T γδ או TCR על תאי γδ T, ו-CD56 על תאי הרג טבעיים או תאי NK.

הנוגדנים המצומדים פלואורוכרום B נקשרים ל-CD4 ו-CD8 בתאי T, CD19 בתאי B ו-CD14 במונוציטים.

באמצעות ציטומטריית זרימה, זהה את תת-קבוצות התאים החיים.

בעוד שתאי CD8⁺ ו-CD4⁺ T הם CD3⁺, תאי CD4⁺ נמצאים בין תאים חיוביים בודדים CD3 לתאים חיוביים כפולים CD3-CD8

.

תאי γδ T מבטאים γδ TCRs ו-CD3 גבוה יותר בהשוואה לתאי CD4⁺ ו-CD8⁺.

תאי B ותאי NK הם CD3^- אך מזוהים על ידי CD19 בתאי B ו-CD56 בתאי NK.

מונוציטים מזוהים על ידי ביטוי CD14.

כדי להכין את ה- PBMCs לצביעה, העבירו 100 מיקרוליטר מכל דגימה לצלחת תחתונה V של 96 בארות. צנטריפוגה את הצלחת בחום של 350 פעמים גרם למשך שלוש דקות בטמפרטורת החדר. בזהירות, שאפו את הסופרנטנט מבלי להפריע לכדורית התא. לכל באר יש להוסיף 100 מיקרוליטר PBS המכיל צבע חי/מת הניתן לתיקון המגיב עם אמין חופשי על חלבונים, ולהשעות מחדש את תערובת PBMC בזהירות.

לאחר מכן, אפשר לצלחת לשבת 10 דקות בטמפרטורת החדר לתיוג תאים מתים. לכל דגימה י