בדיקה מבוססת CFSE לניטור נדידת תאים דנדריטיים בעור לבלוטות לימפה מנקזות בעכברים נגועים

קח עכבר מורדם. הזריק תרחיף Mycobacterium bovis BCG לתוך כרית כף הרגל האחורית.

תאים דנדריטיים בעור מזהים ופגוציטוזה את המיקובקטריה.

יתר על כן, הרכיבים המיקובקטריאליים המעובדים מוצגים על מולקולות MHC class-II.

הזרקו את צבע ה-CFSE החדיר לתאים לאותו כרית כף הרגל.

אסטרזות תוך-תאיות מבקעות את CFSE לתוצר פלואורסצנטי אטום לתאים, ומכתימות את התאים.

יתר על כן, תאים דנדריטיים מופעלים נודדים דרך כלי הלימפה לבלוטת הלימפה הפופליטאלית, ומפעילים תאי T.

כורתים בניתוח את בלוטת הלימפה הפופליטאלית והופכים אותה להומוגניזציה דרך מסננת, ומקבלים תרחיף חד-תאי.

צנטריפוגה והשעיית התאים במאגר.

העבר תאים לצינור ציטומטריית זרימה. צנטריפוגה ולטפל בתאים בקוקטייל נוגדנים.

נוגדנים חוסמי FC חוסמים קולטני Fc, בעוד נוגדנים מתויגים פלואורופור נקשרים לסמני פני השטח מולקולות CD11c ו-MHC class-II בתאי החיסון.

באמצעות ציטומטריית זרימה, זהה את התאים הדנדריטיים של העור המסומנים ב-CFSE עם MHC-II גבוה וביטוי CD11c נמוך, ואשר את נדידתם לבלוטת הלימפה.

להזרקת Mycobacterium bovis BCG, לאחר אישור רמת ההרגעה המתאימה על ידי צביטת הבוהן, השתמש במזרק המצויד במחט בגודל 29 אינץ' כדי לחסן את כרית כף הרגל האחורית של עכבר בן 8 עד 12 שבועות עם 1 x 10⁶ יחידות יוצרות מושבה של החיידק ו-30 מיקרוליטר PBS. הזרקת רפידות בקרה עם PBS בלבד. לאחר מכן,