הערכה בזמן אמת של הפעילות האנטי-פטרייתית של תאי חיסון אנושיים ראשוניים

התחל עם צלחת הדמיה מבוססת זכוכית המכילה תרחיף של נויטרופילים אנושיים - או תאים חיסוניים ודמיין אותה תחת מערכת הדמיה פלואורסצנטית.

הציגו קונידיה מדווחת אספרגילוס פלואורסצנטית מהונדסת גנטית - או נבגי פטריות, וצלמו תמונות במרווחי זמן קבועים של עד 6 שעות.

נבגי הפטרייה מבטאים חלבונים פלואורסצנטיים אדומים ומסומנים חיצונית בפלואורופורים מג'נטה בלתי מתכלים - המסייעים להבחין בין תאים מתים לתאים חיים.

במהלך הדגירה, נויטרופילים מקיימים אינטראקציה עם מולקולות הקשורות לפתוגן על קונידיה באמצעות קולטנים לזיהוי דפוסים, מה שמקל על בליעתם בתוך פגוזום.

מאוחר יותר, הפגוזום מתמזג עם הליזוזום המכיל אנזים, ויוצר פגוליזוזום.

בתוך הפגוליזוזום, מיני החמצן והאנזימים התגובתיים מפרקים את הקונידיה.

במהלך הדמיית תאים חיים, בנקודת הזמן הראשונית, פלואורסצנציה אדומה ומג'נטה אינטנסיבית בתוך הפגוזום של נויטרופילים מעידה על נוכחות של קונידיה חיה.

עם הזמן, ירידה בקרינה האדומה עם שמירה על פלואורסצנציה מג'נטה מעידה על השפלה של קונידיה, המאשרת את הפעילות האנטי פטרייתית של נויטרופילים.

כדי לדמיין את DsRed ו-AlexaFlour 633 במהלך מיקרוסקופיה, מחממים תנור מיקרוסקופ והפעל את המיקרוסקופ ואת המחשב. לאחר מכן, הוסף 100 מיקרוליטר של 3 כפול 10 למתלה קונידיאלי 6 למיליליטר FLARE לבארות המתאימות של צלחת ההדמיה. רשום את הזמן שבו מוסיפים קונידיות FLARE.

התקן את צלחת ההדמיה על במת המיקרוסקופ. לאחר מכן, בהגדרות הרכישה, הגדר את עוצמת הלייזר ל-10% ואת זמן החשיפה לשנייה אחת, והתאם את רגישות המצלמה לתמונה ברורה אך לא חשופת יתר של DsRed ו-AF 633, והגדר רשימה של נקודות שלב. אתחול הדמיה כאשר כל הנקודות ממוקדות, ערוצי הפלואורסצנט ממוטבים וזמן המחזור ומשך הזמן מוגדרים.