בדיקת עיכוב גדילה נדחית להערכת ההשפעה של תרכובות אנטי-מיקרוביאליות שמקורן בחיידקים

התחל עם צלחת אגר המכילה חומרים מזינים והניח טיפה של תרבית לילה של חיידקים ראשוניים המייצרים מעכבים במרכז.

הניחו לתרבית להתייבש, הבטיחו התפשטות מינימלית של חיידקים, ודגרו.

חיידקים בודדים יוצרים מושבות נפרדות ומפרישים תרכובות אנטי-מיקרוביאליות - מולקולות מעכבות המתפזרות דרך האגר למרחק מסוים.

רססו תרבית מדוללת של זן חיידקים מתחרה באופן שווה על פני האגר המכיל מושבות של חיידקים ראשוניים.

במהלך הדגירה, התרכובות האנטי-מיקרוביאליות מקיימות אינטראקציה עם החיידקים המתחרים ומשבשות את התהליכים התאיים החיוניים שלהם.

התוצאה היא מוות של חיידקים מתחרים באזור הספציפי הזה, מה שגורם לירידה משמעותית בצמיחת החיידקים.

באזור ללא תרכובות אנטי-מיקרוביאליות, חיידקים מתחרים מנצלים את חומרי המזון ויוצרים מושבות נפרדות.

זה יוצר דפוס צמיחה דיפרנציאלי עם אזור עיכוב מובהק. קבע את הקוטר של אזור זה ואת בהירות האזור כדי להעריך את ההשפעה של תרכובות אנטי-מיקרוביאליות שמקורן בחיידקים.

כדי להכין תרביות לילה חיידקיות, פס את זני המתחרה והמעכב על צלחת אגר BHI סטרילית ודגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באופן אירובי למשך כ-18 שעות. בבקבוק אוניברסלי של 28 מיליליטר, יש לחסן 10 מיליליטר מרק BHI סטרילי עם מושבה אחת של זן החיידקים המתחרה הנדרש.

דגרו את התרבית בשייקר מסלולי אוניברסלי ב-37 מעלות צלזיוס ו-250 סל"ד למשך הלילה. למחרת, ודא שצלחות האגר יבשות לחלוטין ללא עיבוי על המכסה כדי למנוע את התפשטות החיסון על הצלחת. פיפטה 25 מיקרוליטר של תרבית הלילה על מרכז לוחות האגר, תוך הימנעות מלחיצה מוחלטת על בוכנת הפיפטה כדי למנוע בועות אוויר המרססות את התרבית על פני האגר.

אפשר לתרבות להתייבש בטמפרטורת החדר כדי להגביל את התפשטות התרבות. לאחר מכן, דגרו על לוחות האגר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באופן אירובי למשך הלילה. לאחר גידול תרבית לילה תוך כדי עבודה תחת ארון בטיחות ברמה 2 מרופד בנייר סופג, השתמש במרק BHI כדי לדלל את התרבית פי עשרה כדי להניב בערך פי 4 פי 10 עד CFU השישי למיליליטר. לאחר מכן, שפכו את התרבית המדוללת לבקבוק וופורייזר בושם סטרילי מפלסטיק.

כדי לבצע בדיקת עיכוב צמיחה דחויה, יש לרסס את התרבית דרך כל אחד מבקבוקי האידוי כדי להבטיח שהתרבית נטענת במנגנון הריסוס לפני הריסוס על האגר. ממרחק של כ -15 סנטימטרים מעל האגר, יש לרסס כ -250 מיקרוליטר של תרבית מדוללת על פני כל שטח האגר. דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באופן אירובי למשך הלילה.

כדי לפרש עיכוב גדילה דחוי, מדוד את אזור עיכוב הצמיחה של זן המתחרה המרוסס במילימטרים, והפחית את קוטר הנקודה המרכזית של יצרן המעכב. לבסוף, רשום את ציון הבהירות עבור אזורי עיכוב בהתאם לפרוטוקול הטקסט.