בדיקת התקשרות ויראלית לבדיקת תרכובות אנטי-ויראליות

התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה חד-שכבת תאי הפטומה אנושית מקוררת מראש.

לטפל בבארות בדיקה בתערובת של נגיף הפטיטיס C מהונדס גנטית הנושא את הגן לוציפראז ותרכובת מטרה; לטפל בבארות בקרה עם הנגיף בלבד.

בבארות הבדיקה, מולקולות מטרה מקיימות אינטראקציה עם גליקופרוטאינים נגיפיים וקולטני פני התא, ומונעות התקשרות ויראלית.

עם זאת, בבארות בקרה, גליקופרוטאינים נגיפיים מקיימים אינטראקציה עם קולטני פני התא, ומאפשרים את הצמדתם. טמפרטורה נמוכה מעכבת את כניסת הנגיף.

הסירו את הסופרנטנט, הכניסו מדיום ודגרו מחדש בטמפרטורה האופטימלית, מה שמקל על כניסת הנגיף.

עם כניסתו, הנגיף משחרר את החומר הגנטי, ומתחיל סינתזה של חלבונים נגיפיים ואנזימי לוציפראז, המופרשים לתווך.

העבירו את הסופרנטנט המכיל לוציפראז, והציגו מצע.

האינטראקציה בין אנזים לסובסטרט מייצרת אור ביחס לרמות הלוציפראז.

עוצמת האור הנמוכה יותר בבארות הבדיקה, בהשוואה לבארות הבקרה, מעידה על המאפיין האנטי-ויראלי של תרכובת המטרה.

לבדיקת ההתקשרות הנגיפית, צלחת 1 x 10⁴ תאים לבאר בצלחת של 96 בארות, ודגירה למשך הלילה לחיבור תאים. למחרת בבוקר, ראשית, יש לקרר את צלחת 96 הבארות המכילה את שכבת התא החד-שכבתית ב-4 מעלות צלזיוס למשך שעה.

הכינו את תרכובות הבדיקה ותערובת הנגיפים על קרח. לדוגמה, HCV-CHLA, HCV - 1% DMSO, או תמיסות HCV-heparin בקרה חיובית עם 10² FFU וירוס ל