שיטת צלחת מיקרוטיטר להערכת הריכוז המעכב המינימלי של אנטיביוטיקה

קח צלחות מיקרוטיטר המכילות אנטיביוטיקה אמינוגליקוזיד מדוללת סדרתית. אחת הצלחות מכילה NTBC, תרופה סינתטית.

הכירו את Pseudomonas aeruginosa, חיידק גרם שלילי, ודגרו.

החיידקים מייצרים פיומלנין - פיגמנט חוץ-תאי מגן - בבארות שלא טופלו ב-NTBC, בעוד שהתרופה מונעת ייצור פיומלנין.

האנטיביוטיקה הקטיונית נקשרת לליפופוליסכרידים אניוניים, או LPS, על הממברנה החיצונית של החיידקים, עוקרת את הגשרים הקטיוניים ומערערת את יציבות הממברנה.

עם כניסת החיידקים, האנטיביוטיקה נקשרת לאתר האמינואציל, או אתר A, בתת-היחידה הריבוזומלית 30S.

האנטיביוטיקה הקשורה מונעת את קשירת האמינואציל-tRNA ואת התנועה הריבוזומלית על פני mRNA, מפריעה לסינתזת החלבון ומעכבת את צמיחת החיידקים.

לאחר הדגירה, מדוד את הצפיפות האופטית של התרבות כדי להעריך את צמיחת החיידקים.

ריכוז האנטיביוטיקה הנמוך ביותר המונע צמיחת חיידקים הוא הריכוז המעכב המינימלי או MIC.

ערכי MIC דומים עבור בארות שטופלו ב-NTBC ולא טופלו ב-NTBC מצביעים על כך שאין השפעה של NTBC על הרגישות לאנטיביוטיקה של חיידקים.

יום אחד לפני בדיקת ה-MIC, הכינו תרביות של הזנים שייבדקו ב-LB עם ובלי 2-[2-nitro-4-trifluoromethyl)benzoyl]-1-3 cyclohexanedione או NTBC. הדגמה זו משתמשת ברמה המייצגת של 300 מיקרו-טוחנות של NTBC. שיטת הטיטרציה לקביעת הריכוז המתאים של NTBC מתוארת בטקסט הפרוטוקול. ד