אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:10 דק׳ • July 8th, 2025
קחו בארות המכילות הידרוג'לים פוליאקרילאמיד בעלי קשיחות משתנה המכוסים בקולגן, המחקים מטריצה חוץ-תאית פיזיולוגית, או ECM.
הוסף תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים היוצרים הידבקויות מוקדיות, או FAs - קומפלקסים המתווכים את קשירת התא ל-ECM - כדי לחוש בנוקשות ההידרוג'ל.
הידרוג'לים נוקשים יותר מעלים את ביטוי פני התא של וימנטין, מרכיב ציטו-שלד, בהשוואה להידרוג'לים רכים יותר.
הוסף חיידקי ליסטריה מונוציטוגנס, המהונדסים לבטא חלבון פלואורסצנטי תחת המקדם לחלבון המעורר הרכבה של אקטין, או ActA.
צנטריפוגה לסנכרון מגע חיידקים עם תאי המארח, ודגירה.
החיידקים נקשרים לווימנטין. יותר וימנטין על תאי המארח הנוקשים יותר הקשורים להידרוג'ל מוביל ליותר היצמדות חיידקים ואנדוציטוזיס.
הוסיפו אנטיביוטיקה, והסירו חיידקים לא מופנמים.
החיידקים המופנמים מפרישים רעלים, וקורעים את קרום האנדוזום. בריחה ציטופלזמית מפעילה את מקדם ה-ActA כדי לבטא את החלבון הפלואורסצנטי, ולסמן חיידקים תוך-תאיים.
נתק את התאים באופן אנזימטי. באמצעות ציטומטריית זרימה, זהה פלואורסצנטיות גבוהה יותר בתאי מארח השוכנים על הידרוג'לים נוקשים יותר, מה שמעיד על הפנמת חיידקים גדולה יותר.
לאחר הכנת תרבית לילה של L. monocytogenes על פי פרוטוקול הטקסט, העבירו 1 מיליליטר מהתרבית לצינור מיקרו-צנטריפוגה, וסובבו אותו בטמפרטורה של 2,000 פעמים גרם וטמפרטורת החדר למשך 4 ד
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים