מיקרוסקופ כמותי בהילוך מהיר להערכת הפצת חיידקים חוץ-תאיים תלויי קשיחות

קח צלחת מרובת בארות עם חד-שכבות חד-שכבתיות של תאי אנדותל אנושיים דביקים על הידרוג'לים פוליאקרילאמיד מצופים קולגן בעלי קשיחות משתנה.

תאים על הידרוג'לים נוקשים יותר עוברים ארגון מחדש משמעותי של השלד התא, מה שמגביר את המתח התוך תאי, בהשוואה להידרוג'לים רכים יותר.

שטפו תאים במדיה והוסיפו ליסטריה מונוציטוגנס מהונדסים - המבטאים חלבון פלואורסצנטי תחת מקדם החלבון המעורר הרכבה של אקטין (ActA).

צנטריפוגה כדי להקל על מגע בין תאים לחיידקים. דגירה כדי לתווך אנדוציטוזיס חיידקית.

שטפו עם מדיה. טפל בגנטמיצין כדי לחסל חיידקים לא מופנמים. דגירה.

חיידקים מופנמים משחררים רעלנים יוצרי נקבוביות, ומשבשים את הממברנות הפגוזומליות. חיידקים ציטוזוליים מווסתים את ביטוי ActA וחלבון פלואורסצנטי, ומסמנים חיידקים תוך-תאיים.

חלבוני ActA גורמים לפילמור אקטין, יוצרים זנב שביט אקטין המניע את החיידקים קדימה, גורם להפנמה על ידי תאים שכנים ומקדם את התפשטותם.

לאחר הדגירה, השתמש במדיה המכילה צבע כדי לצבוע גרעיני תאים. יש להחליף את המדיה במדיה המכילה גנטמיצין.

בצע מיקרוסקופיה דולג זמן.

הידרוג'לים רכים יותר מקדמים התפשטות מהירה של חיידקים בין-תאיים בהשוואה להידרוג'לים נוקשים יותר עם מתח תוך תאי מוגבר, מה שמרמז על התפשטות חיידקים תלויה בנוקשות המטריצה.

לאחר הכנת תרבית לילה של L. monocytogenes על פי פרוטוקול הטקסט, העבירו 1 מ