קביעת יעילות אנטי-ויראלית של תרופות ניסיוניות באמצעות בדיקת פלאק

התחל עם דגימה המכילה וירוס שהתקבלה מקרנית חזיר נגועה שטופלה בתרופה אנטי-ויראלית.

בצע דילול סדרתי של הדגימה כדי ליצור רצף של ירידה בריכוזי הנגיף.

דילול אופטימלי מונע זיהום של תא בודד על ידי וירוסים מרובים.

הכניסו את הדגימות המדוללות לחד-שכבת תא מארח ודגרו.

הנגיף נצמד לקולטן התא המארח, נכנס לתא ויוזם את שכפולו. התא הנגוע משחרר ויריונים.

הוסף מתיל צלולוז, חומר צמיג המגביל את הנגיפים לתאים הסמוכים.

לאחר מכן, הנגיפים גורמים למוות תאים ולהיווצרות רובד באזור הנגוע.

הוסף מתנול כדי לתקן את התאים.

השתמש בסגול קריסטל כדי להכתים את התאים החיים.

התבונן בפלאקים כאזורים ברורים המעידים על תאים נגועים ומוות של תאים, מוקפים בתאים לא נגועים צבועים בסגול

.

לבסוף, ספרו את מספר הפלאקים בדילול הגבוה ביותר כדי לכמת את טיטר הנגיף בתמיסה ההתחלתית כדי לקבוע את יעילות התרופה האנטי-ויראלית.

כדי לכמת את כמות הנגיף שנאספה מכל קרנית, הכינו יומן₁₀ דילול חד פעמי של הנגיף במדיום נטול סרום בצינורות מיקרו-צנטריפוגה עד שמגיעים לדילול של 1 x ^10-8.

לאחר שאיבת מצע הגידול מכל באר תאים, העבירו 1 מיליליטר מכל דילול נגיף, החל מ-1 x ^10-3 לחד-שכבות התאים המצופות, והניחו את התאים הנגועים בחממת תרבית התאים למשך שעתיים. בתום הדגירה יש לשטוף בעדינות כל באר פעמיים עם PBS לפני הוספת 2 מיליליטר מדיום עמוס מתיל צלולוז לכל באר למשך 72 שעות, או עד שניתן להבחין בהיווצרות פלאק.

לאחר התבוננות בפלאק, הוסף לאט 1 מיליליטר מתנול לפינה של כל באר למשך 15 דקות דגירה בטמפרטורת החדר. בתום הדגירה, שאפו לאט את התוכן מכל באר מבלי להפריע לשכבת התא החד-שכבתית.

לאחר מכן, סמנו כל באר ב-1 מיליליטר של תמיסת עבודה בצבע סגול קריסטל, ודאגו שכל התאים יהיו מכוסים למשך 30 דקות של דגירה מוגנת מפני אור. בתום הדגירה יש להשליך את התמיסה ולייבש את הבארות על דף נייר סופג. לאחר מכן, ספרו את מספר הפלאקים בבאר הדילול הגבוהה ביותר כדי לכמת את תכולת הנגיף הכוללת בתמיסה ההתחלתית 3 פעמים.