בדיקת מיקרודילוציה במבחנה של מרק להקרנה של תרכובות אנטי פטרייתיות

קחו צלחת מיקרוטיטר, והוסיפו דילולים סדרתיים של פפטידים אנטי-מיקרוביאליים חדשים או AMPs - תרכובות הבדיקה.

ייעד תת-קבוצה של בארות כבקרות צמיחה, והוסף מים סטריליים ללא ה-AMPs.

הוסף פטרייה פתוגנית התלויה באמצעי גידול לבארות נבחרות.

הוסף רק את המדיה, נטולת הפטרייה, בתת-קבוצה של בארות המוגדרות כבקרות ריקות.

אוטמים את הצלחת ודוגרים בתנאים לחים התורמים לצמיחת פטריות.

לאחר הדגירה, התבונן בבארות תחת מיקרוסקופ.

בקרות הגדילה נראות עכורות עקב גדילה פטרייתית בהיעדר AMPs. עכירות בכל הדילולים של AMP מעידה על חוסר יעילותו נגד הפטרייה.

הפקדים הריקים, נטולי גידול פטרייתי, נראים ברורים. השוו בארות בדיקה עם הפקדים הריקים כדי לאשר את היעדר הגדילה, מה שמצביע על הפעילות האנטי-פטרייתית של AMPs.

הריכוז הנמוך ביותר של AMP שמעכב גדילה פטרייתית נקרא הריכוז המעכב המינימלי, או MIC.

הבדיקה האנטי פטרייתית מבוצעת בשלוש פעמים במיקרו-פלטות פוליסטירן של 96 בארות באמצעות דילול סדרתי פי 2 של כל פפטיד ובקרה אנטי פטרייתית ונפח סופי של 50 מיקרוליטר לבאר.

השלב המכריע ביותר בפרוטוקול הוא הדילולים הסדרתיים. אז היזהר מאוד במהלך השלבים הבאים כדי למנוע כל שגיאה שתפגע בכל הניתוח שלך.

בעזרת פיפטה, הוסף 100 מיקרוליטר של הפפטיד האנטי פטרייתי בריכוז החוזק הכפול של הריכוז הסופי הרצוי הגבוה ביותר בעמודות אחת עד שלוש בשורה A. בעזרת פיפט