בדיקת ניצול ATP לקביעת הישרדות חיידקים תחת טיפול אנטיביוטי

התחל בזריעת תרבית חיידקים לתוך צלחת בדיקה. לאחר מכן, דגרו על הצלחת.

לתאי החיידקים יש הידבקויות ופילי על פני השטח המאפשרים להם להיצמד זה לזה וליצור אגרגטים קטנים.

הוסף ריכוזי אנטיביוטיקה משתנים לבארות, והשאיר אחת ללא טיפול לבקרה.

מולקולות האנטיביוטיקה מקיימות אינטראקציה עם חיידקים רגישים, משפיעות על יכולתם לגדול ולהתרבות, מה שמוביל למותם.

החיידקים העמידים לאנטיביוטיקה נשארים פעילים מבחינה מטבולית, ומייצרים מולקולות ATP.

השתמש בסוניקטור כדי לשבש את תאי החיידקים, לשחרר את התוכן התוך תאי שלהם, כולל ATP.

הוסף מגיב זוהר לניצול ATP המכיל לוציפרין, אנזים לוציפראז וגורמים משלימים אחרים.

לוציפראז משתמש ב-ATP ובחמצן כדי להמיר לוציפרין לאוקסילוציפרין מעורר.

האוקסילוציפרין עובר לאחר מכן למצב הקרקע שלו, ופולט אור זוהר.

מדוד את הספיגה באמצעות קורא צלחות.

הירידה בספיגה בריכוזים גבוהים יותר של אנטיביוטיקה מצביעה על ייצור ATP נמוך יותר, מה שמעיד על שיעור הישרדות מופחת של חיידקים.

מדוד את הצפיפות האופטית ב-650 ננומטר או OD₆₅₀ כדי לקבוע את ריכוז החיידקים המרחפים, והתאם את ריכוז ה-GC לכ-1 x 10⁸ יחידות יוצרות מושבה למיליליטר. לאחר מכן, הוסף 99 מיקרוליטר של תרחיף ה- GC לבארות בודדות של צלחת של 96 בארות, ואפשר לחיידקים להצטבר ב -37 מעלות צלזיוס ו -5% פחמן דו חמצני למשך 6 שעות.

בתום הדגירה, הוסיפו 1 מיקרול