קביעת תפקידם של תאים דמויי נויטרופילים ברגישות תאי לימפומה לתרופה ניסיונית

קח צלחת מרובת בארות המכילה מונוקולטורות ספרואידיות תלת מימדיות של תאי לימפומה, תאי דם לבנים סרטניים ותרביות משותפות של לימפומה ותאים דמויי נויטרופילים במטריצת קרום בסיס.

הוסף תרופת בדיקה שנקשרת לטובולין תוך-תאי ומשבשת את פילמור המיקרו-צינורות, וכתוצאה מכך אפופטוזיס תאי.

בתרבית המשותפת, מגע ישיר של תאי לימפומה מפעיל את התאים דמויי הנויטרופילים, וגורם להפרשת ציטוקינים.

ציטוקינים אלה מקיימים אינטראקציה עם קולטני תאי לימפומה, מפעילים מפלי איתות במורד הזרם ומווסתים את ביטוי החלבון האנטי-אפופטוטי, ומקדמים את הישרדות התאים.

השלך את המדיה. הוסף מאגר דיסוציאציה כדי לשבש את ההידבקות התאית.

מגרדים את הספרואידים ומדגרים אותם תחת תסיסה. העבירו את המתלה לצינורות והמשיכו בתסיסה ליצירת מתלים חד-תאיים.

הציגו קוקטייל נוגדנים מצומד פלואורופור המסמן לימפומה ותאים דמויי נויטרופילים.

הוסף נספח V מתויג פלואורופור ופרופידיום יודיד כדי לסמן תאים אפופטוטיים ומתים.

באמצעות ציטומטריית זרימה, לזהות הישרדות מוגברת של תאי לימפומה בתרבית המשותפת, מה שמעיד על הגנה מתווכת נויטרופילים מפני התרופה.

כדי להקים תרבית משותפת תלת מימדית, הוסף 50,000 תאי לימפומה B RL בלבד, או ערבב עם תאים מובחנים HL60 בצינורות סטריליים של 15 מיליליטר.

סובב את הדגימות והשהה מחדש את הכדורים ב -300 מיקרוליטר של מטריצת קרום מרתף באמצעות קצה פי