בדיקה להערכת דומיננטיות חיסונית בתגובות לימפוציטים ציטוטוקסיים מסוג T
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:00 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם תאי מטרה עם תווית צבע פלואורסצנטי המציגים אפיטופ פפטיד לא תגובתי או אפיטופים של פפטידים שמקורם באנטיגן גידול עם אימונוגניות משתנה.
תאים אלה מציגים עוצמות פלואורסצנטיות משתנות - נמוכות, בינוניות וגבוהות - המתאימות להצגת אפיטופים של פפטידים לא תגובתיים, תת-דומיננטיים ואימונודומיננטיים, בהתאמה.
יש לתת את תרחיף התאים דרך הווריד לעכבר רגיש.
התאים המוזרקים עוברים לטחול המכיל אוכלוסיות תאי חיסון, כולל לימפוציטים T ציטוטוקסיים או CTLs.
בתוך הטחול, CTLs מקיימים אינטראקציה עם האפיטופים של תאי המטרה.
אפיטופים אימונודומיננטיים, בהיותם אימונוגניים יותר, מעוררים תגובה חיסונית חזקה של CTL, משחררים חומרים ציטוטוקסיים וכתוצאה מכך ליזיס תאים פלואורסצנטיים בעוצמה גבוהה.
אוספים את טחול העכבר ומשבשים אותו מכנית. הוסף מאגר ליזה כדי לחסל כדוריות דם אדומות ולסנן את המתלה.
צנטריפוגה והשעיה מחדש של כדור התא.
מיין את התאים באמצעות ממיין תאים המופעל על ידי פלואורסצנטיות. ההפחתה בתאים פלואורסצנטיים בעוצמה גבוהה, בהשוואה לתאים פלואורסצנטיים בעוצמה בינונית ונמוכה, מאשרת את האימונודומיננטיות בתגובת לימפוציטים T ציטוטוקסיים.
להזרקת תאי המטרה, ראשית, מערבול בעדינות את צינורות המקור ואגד את שלושת תרחיפי התאים המסומנים ב-CFSE לצינור חדש ביחסים שווים. מלאו את תכולת הצינור ב-PBS סטרילי, ואספו את התאים על ידי צנ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים