אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:46 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת מרובת בארות עם תרבית תאי גזע מזנכימליים דביקה, או MSC.
הוסף תאים חד-גרעיניים בדם היקפי, או PBMCs, ודגר.
MSCs מפרישים גורם גדילה של הפטוציטים, וגורמים למונוציטים לרכוש פנוטיפ אימונומודולטורי, ומייצרים אינטרלוקין-10, או IL-10.
העבירו את הסופרנטנט המכיל PBMC לשפופרת.
הוסף קשירת חרוזים מגנטיים מצופים נוגדן לסמן משטח מונוציטים CD14.
השתמש במפריד מגנטי כדי לבודד את המונוציטים CD14+, והוסף אותם לבארות צלחות מרובות בארות בריכוזים הולכים וגדלים.
הציגו תאי אפקטור CD4+ T בצבע פלואורסצנטי עם תווית CFSE.
הוסף מיקרו-חרוזים מצומדים לנוגדנים הנקשרים במיוחד לסמני פני השטח של תאי T CD3 ו-CD28, ומפעילים את התאים.
במונוציטים חסרי ביקורת, תאי T מופעלים מתרבים, כאשר כל חלוקת תאים מפחיתה את עוצמת הקרינה של CFSE בתאי הבת.
עם זאת, בתרביות משותפות, מונוציטים המושרים על ידי MSC מפרישים IL-10, ומדכאים את התפשטות תאי ה-T האפקטיביים.
באמצעות ציטומטריית זרימה, צפה בפחות תאי T המציגים עוצמות פלואורסצנטיות מופחתות של CFSE עם עלייה בריכוזי מונוציטים, מה שמעיד על דיכוי התפשטות תאי T אפקטור על ידי מונוציטים המושרים על ידי MSC.
כדי לבצע בדיקת דיכוי אפקטור, התחל בהקמת תרבית משותפת של MSC-PBMC עם 2.5 x 106 PBMCs, בתרבית משותפת עם 250,000 MSCs כדי להבטיח מספיק PBMCs בתרבית משותפת של MSC לבחירת תת-אוכלוסייה.
לאחר 48 עד 72 שעות ב-37 מעלות צלזיוס, בחר את הלויקוציטים האימונומודולטוריים המושרים על ידי MSC המעניינים עם החרוזים המגנטיים המתאימים. לאחר מכן, הוסף תאי T אלוגניים חיוביים ל-CD4 המסומנים ב-CFSE ב-1 מיליליטר של מדיום לויקוציטים שלם לכל באר, ביחסי ניסוי שונים.
לאחר מכן, הוסף מיקרו-חרוזים מצומדים נגד CD3/28 ביחס של 1 ל-1 חרוז לתא כדי לעורר את תאי ה-T החיוביים ל-CD4. ביום השלישי של תרבית משותפת, העריכו את התפשטות תאי ה-T החיוביים ל-CD4 המסומנים ב-CFSE על ידי ציטומטריית זרימה.