בדיקת מבחנה להערכת ההשפעה האימונומודולטורית של מונוציטים על התפשטות לויקוציטים

קח צלחת מרובת בארות עם תרבית תאי גזע מזנכימליים דביקה, או MSC.

הוסף תאים חד-גרעיניים בדם היקפי, או PBMCs, ודגר.

MSCs מפרישים גורם גדילה של הפטוציטים, וגורמים למונוציטים לרכוש פנוטיפ אימונומודולטורי, ומייצרים אינטרלוקין-10, או IL-10.

העבירו את הסופרנטנט המכיל PBMC לשפופרת.

הוסף קשירת חרוזים מגנטיים מצופים נוגדן לסמן משטח מונוציטים CD14.

השתמש במפריד מגנטי כדי לבודד את המונוציטים CD14+, והוסף אותם לבארות צלחות מרובות בארות בריכוזים הולכים וגדלים.

הציגו תאי אפקטור CD4+ T בצבע פלואורסצנטי עם תווית CFSE.

הוסף מיקרו-חרוזים מצומדים לנוגדנים הנקשרים במיוחד לסמני פני השטח של תאי T CD3 ו-CD28, ומפעילים את התאים.

במונוציטים חסרי ביקורת, תאי T מופעלים מתרבים, כאשר כל חלוקת תאים מפחיתה את עוצמת הקרינה של CFSE בתאי הבת.

עם זאת, בתרביות משותפות, מונוציטים המושרים על ידי MSC מפרישים IL-10, ומדכאים את התפשטות תאי ה-T האפקטיביים.

באמצעות ציטומטריית זרימה, צפה בפחות תאי T המציגים עוצמות פלואורסצנטיות מופחתות של CFSE עם עלייה בריכוזי מונוציטים, מה שמעיד על דיכוי התפשטות תאי T אפקטור על ידי מונוציטים המושרים על ידי MSC.

כדי לבצע בדיקת דיכוי אפקטור, התחל בהקמת תרבית משותפת של MSC-PBMC עם 2.5 x 10⁶ PBMCs, בתרבית משותפת עם 250,000 MSCs כדי להבטיח מספיק PBMCs בתרבית משותפת של MSC לבחירת תת-אוכלוסייה.

לאחר