כימות מבוסס ציטומטריה של זרימה של תאי סרטן מזדקנים הנגרמים על ידי טיפול

0 צפיות4:19 דק' • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קח תאים סרטניים שטופלו מראש בתרופה כימותרפית הגורמת להזדקנות באחוז מהתאים.

תאים אלה צוברים גרגירי ליפופוסין אוטו-פלואורסצנטיים, סמן הזדקנות ידוע.

הוסף אנטיביוטיקה שנכנסת לתאים ומעכבת את משאבות הפרוטונים הליזוזומליות, ומונעת החמצה ליזוזומלית.

עלייה ב-pH משביתה את האנזימים הליזוזומליים.

תאים מזדקנים מבטאים יתר על המידה β-גלקטוזידאז ליזוזומלי אפילו ב-pH כמעט ניטרלי, מה שהופך אותו לסמן ביולוגי להזדקנות.

הציגו מצע β-גלקטוזידאז. דגירה.

β-גלקטוזידאז מבצע הידרוליזה של המצע המופנם לתוצר פלואורסצנטי, ומסמן את התאים המזדקנים.

צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט.

הוסף צבע כדאיות לתא. בתוך תאים חיים, אסטרזות פעילות ממירות את הצבע לתוצר פלואורסצנטי אטום לממברנה. תאים מתים עם שלמות הממברנה שנפגעה נותרים ללא כתמים.

באמצעות ציטומטריית זרימה, זהה את התאים הקיימים המציגים את הסמנים הכפולים ליפופוסין ומצע פלואורסצנטי β-גלקטוזידאז, המעידים על תאים מזדקנים.

כמת את אחוז התאים המזדקנים כדי להדגים את יעילות התרופה.

ראשית, התאם את ה-pH הליזוזומלי של דגימות תאים מתורבתים על ידי הוספת תמיסה של בפילומיצין מיקרו-מולרי A ב-DMEM לכדור התא בריכוז של אחד כפול 10 לתאים השישיים למיליליטר, ופיפטה לערבוב. דגירה למשך 30 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס על מסובב במהירות איטית. לאחר מכן, כדי לצבוע בטא-גלקטוזידאז הקשור להזדקנות, הוסף תמיסת מלאי DDAOG ב-10 מיקרוגרם למיליליטר לדגימות ללא כביסה.

מניחים על מסובב למשך 60 דקות, מוגן מפני אור ישיר. כמו קודם, צנטריפוגה את הצינורות. הסר את הסופרנטנט ושטוף את הגלולה עם מיליליטר אחד של 0.5% BSA קר כקרח ב-PBS. לאחר מכן, הוסף 300 מיקרוליטר של תמיסת סידן סגול מדולל 450 AM לכדורי התאים השטופים. דגירה במשך 15 דקות על קרח בחושך.

העבר את דגימות התאים לצינורות תואמים למכשירי ציטומטריית זרימה. בתוכנת רכישת הנתונים, פתח היסטוגרמה של ערוץ סגול וערוץ אדום רחוק לעומת עלילת נקודות של ערוץ ירוק. התחל רכישת נתוני ציטומטר במהירות יניקה נמוכה והנח את דגימות הבקרה החיוביות המוכתמות ב-DDAOG על יציאת היניקה. התחל לרכוש נתונים לדוגמה. התאם את מתח הערוץ כך שיותר מ-90% מהאירועים כלולים בכל חלקה.

כאשר כל ההגדרות ממוטבות, רשום 10,000 אירועים לכל דגימה. הנח את דגימות הבקרה לרכב בלבד המוכתמות ב-DDAOG על פתח היניקה. התחל איסוף נתונים ותעד 10,000 אירועים לכל דגימה. חפש עלייה באוטופלואורסצנטיות או AF ואות גלקטוזיד DDAO לעומת שליטה חיובית. שמור את הנתונים לדוגמה ב- . פורמט קובץ FCS וייצא את הקבצים למחשב תחנת עבודה המצויד בתוכנת ניתוח ציטומטריית זרימה.

06:47

פרוטוקול בשלב אחד עבור הערכת המצב של מוות של תאים Clonogenic קרינה הנגרמת על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ

סרטונים קשורים

0 צפיות

08:52

מדידת שיעורי תחלופת חלבונים בתאי תרבית סנסנטיים ולא מתחלקים באמצעות תיוג מטבולי וספקטרומטריית מסה

סרטונים קשורים

0 צפיות

08:56

הדמיה סימולטנית וזיהוי מבוסס זרימה-ציטומטריה של סמני סנסנציה פלואורסצנטיים מרובים בתאי סרטן סנסנטיים המושרים על ידי טיפול

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:18

שיטה רגישה לכמת תאי סרטן senescent

סרטונים קשורים

0 צפיות

13:59

מדידה כמותית של מינים חמצן תגובתי, הזדקנות ביולוגית-הקשורים פנוטיפ הפרשה ב Fibroblasts אנושי נורמלי במהלך אונקוגן-induced הזדקנות ביולוגית

סרטונים קשורים

0 צפיות

07:39

א-β-גלטוסידאז-מבוסס על הקרנת ההקרנה לזיהוי תרופות הסאותרפיה

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:03

החולה הפיזיולוגי הנגזרות 3D Spheroids עבור הקרנת תרופות אנטי-נאופלסטית כדי למקד את תאי גזע הסרטן

סרטונים קשורים

0 צפיות

13:53

ניתוח ציטומטרי זרימה של סמנים ביולוגיים אפופטוטיים בתאי סרטן צוואר הרחם SiHa שטופלו ב- Actinomycin D

סרטונים קשורים

0 צפיות

14:01

בדיקה פלואורסצנטית פלואורסצנטית β-גלקטוזידאז הקשורה לזיהוי והעשרה של תאי גידול סנסנטיים על ידי ציטומטריה של זרימה

סרטונים קשורים

0 צפיות

12:19

תרבות משותפת במערכות מבחנה כדי לשחזר את מחזור החיסון לסרטן

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 1 אוגוסט 2026