בדיקה לחקר היווצרות ביופילם המושרה על ידי מלח מרה באמצעות זיהוי מטריצת EPS
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:50 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת מרובת בארות המכילה חיידקי מעיים פתוגניים במדיום גידול.
המדיום בבארות שנבחרו מכיל מלחי מרה - או מולקולות אמפיפתיות בעלות פעילות דמוית דטרגנט - המחקות תנאי גידול קשים.
מלחי מרה משבשים את קרום החיידקים וגורמים נזק ל-DNA ולחלבונים.
כמנגנון נגד, החיידקים יוצרים ביופילם - קהילת חיידקים מובנית העטופה במטריצה המיוצרת בעצמה של חומרים פולימריים חוץ-תאיים, או EPS, המכילה פוליסכרידים, חלבונים, ליפידים וחומצות גרעין ממקור מיקרוביאלי.
שכבת ה-EPS מגנה על החיידקים מפני חשיפה למלחי המרה.
לאחר הדגירה, שאפו את המדיה כדי להסיר חיידקים צפים חופשיים.
יש לטפל במאגר קיבוע כדי לשמר את הארכיטקטורה של הביופילם, ולשטוף כדי להסיר עודפי חיץ.
הוסף קונקנבלין A עם תווית פלואורסצנטית - לקטין שנקשר לפוליסכרידים של EPS, ומסמן את הביופילם. שטפו כדי להסיר עודפי Concanavalin A.
בעזרת קורא צלחות, מדוד את הקרינה. עוצמת פלואורסצנטיות גבוהה יותר בבארות המכילות מלח מרה מצביעה על היווצרות ביופילם המושרה על ידי מלח מרה.
לזיהוי כמותי למחצה של EPS, השתמש בפיפטה רב-ערוצית כדי להעביר את מדיום התרבות לצלחת ברורה של 96 בארות. לאחר מכן, השתמש ב-200 מיקרוליטר של מגיב קיבוע כדי לתקן את הצלחת השחורה למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. כעת, רשום את קריאת OD600 על ידי הגדרת הפקד היטב כריק לסטנדרטיזציה. לאחר מכן, רשום את קריאת המדיום התרב
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים