שיטה להכנת דגימות כדי לדמיין חיידקים יוצרי ביופילם על קורים פטרייתיים

הכניסו מושבה פטרייתית הקשורה לצלופן לתרחיף חיידקים המסומן בפלורסנט. הסר את הצלופן ודגירה.

תאי החיידקים נצמדים למשטח הפטרייה באמצעות מולקולות וקולטנים על פני השטח. החיידקים הדבוקים מפרישים חומרים פולימריים חוץ-תאיים המורכבים מפוליסכרידים, חלבונים ו-DNA, לוכדים את תאי החיידקים ויוצרים את הבסיס המבני של הביופילם.

שוטפים את החלק בתמיסת מלח חזקה כדי להסיר חיידקים קשורים באופן רופף

במאגר פוספט, חותכים קטע מהמושבה.

העבירו את החלק למים סטריליים המכילים נבט חיטה, אגלוטינין, או WGA הקשור לצבע פלואורסצנטי אדום.

WGA, חלבון צמחי, נקשר לשאריות N-אצטיל גלוקוזאמין וחומצה סיאלית, ומאפשר לצבע המחובר להאיר על דופן התא הפטרייתית.

שוטפים את החלק במאגר פוספט.

טבלו חלקית שקופית במאגר. תן לקטע לצוף עליו. יש להרים בעדינות כדי שהחלק ישקע ללא הפרעה לביופילם.

הנח מדיום הרכבה, ואחריו כיסוי לניתוח מיקרוסקופי.

לאחר גידול החיידקים בן לילה, צנטריפוגה את התרבית ב-5,000 פעמים גרם למשך שלוש דקות, ולאחר מכן השעו את הגלולה ב-25 מיליליטר של מאגר אשלגן פוספט סטרילי 0.1 מולרי. לאחר חזרה על הצנטריפוגה, השתמש באותו מאגר כדי להתאים את ריכוז החיידקים הסופי ל-10 עד התאים התשיעי למיליליטר.

מלאו מיקרופלייט בן 6 בארות עם 5 מיליליטר מהתרחיף החיידקי. השתמש בסכין גילוח סטרילי כדי לחתוך את קרום הצלופן של תרבית הפטרייה לריבועים, עם מו