אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:37 דק׳ • July 8th, 2025
לטפל בתרביות עצביות עם ריכוזים הולכים וגדלים של רעלן בדיקה.
הרעלן נכנס לתאים ומשתחרר לציטוזול.
בהתאם לפוטנציאל שלו, הרעלן עשוי למנוע איחוי שלפוחית, ולעכב שחרור נוירוטרנסמיטרים.
החלף את המדיום במאגר המכיל תרכובות נוירו-פרמקולוגיות ספציפיות כדי לחסום פוטנציאל פעולה עצבי.
הניחו את צלחת התרבות על שלב אלקטרופיזיולוגיה. כדי להתחיל להקליט, חבר סומה של תא עצב עם פיפטה המכילה אלקטרודת הקלטה.
הפעל לחץ שלילי קבוע כדי לשאוב חלק ממברנה קטן, וליצור ג'יגה-סיל, אטימה הדוקה המבטיחה הפרעה מינימלית במהלך ההקלטה.
שמור על מתח ממברנה קבוע למדידת זרמים עצביים.
הפעל פעימות לחץ שליליות כדי לקרוע את הממברנה, וליצור מגע ישיר בין הנוירון לפיפטה.
רשום את הזרמים המיוצרים בנוירון עקב ספיגת נוירוטרנסמיטורים, המכונים mEPSCs.
ירידה בתדירות mEPSC עם חשיפה מוגברת לרעלנים מצביעה על עיכוב שחרור נוירוטרנסמיטורים.
לדלל את הסרוטוקסין בוטולינום סרוטיפ A עד פי 100 מהריכוז הסופי הרצוי במדיום תרבית ESN ולחמם ל-37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הוסף נפח מתאים של רעלן לתרביות DIV 21+ ESN. מערבבים את צלחת התרבות וחוזרים לחממה.
בנקודת הזמן הרצויה, שאפו את מדיום תרבית ה-ESN, ושטפו פעמיים עם מאגר הקלטה חוץ-תאי או ERB. לאחר מכן, הוסף 4 מיליליטר של ERB בתוספת 5 טטרודוטוקסין מיקרו-מולרי כדי לחסום פוטנציאל פעולה ו-10 מיקרו-מולרי דו-קוקולין כד
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים